Analisis PCR untuk Hepatitis B

Virus DNA keluarga Hepadnaviridae adalah agen penyebab langsung hepatitis B. Analisis PCR terhadap hepatitis B membolehkan kehadiran virus DNA yang dijangkiti dapat dikesan dalam darah pesakit. Hasil daripada jenis positif pada DNA HBV menunjukkan kehadiran jangkitan dalam darah pesakit. Perlu diingatkan bahawa diagnosis melalui penggunaan analisis PCR tidak hanya dapat menentukan kehadiran jangkitan, tetapi juga beban dan aktivitas kuantitatifnya. Kaedah ini boleh dipercayai, tepat dan boleh dihasilkan. Mengkuasi DNA HBV dengan qPCR boleh digunakan untuk memantau keberkesanan terapi HBV dan bermanfaat untuk memahami sejarah semula jadi HBV di kawasan endemik.

Proses jangkitan dengan hepatitis B berlaku melalui hubungan domestik atau seksual - melalui hubungan langsung dengan darah yang dijangkiti. Selepas jangkitan, virus memasuki sel hati, di mana ia terus membiak aktif. Melalui aliran darah, sel-sel patogenik merebak ke seluruh badan. Perlu diingat bahawa sel-sel hepatitis B sangat tahan terhadap asid dan suhu tinggi. Dia mampu mengekalkan sifatnya yang merosakkan selama enam bulan.

Jenis PCR untuk Hepatitis B

Sehingga kini, terdapat dua jenis diagnostik yang ditetapkan jika anda mengesyaki kehadiran virus hepatitis B: PCR kualitatif (membolehkan anda menentukan dengan ketepatan 100% kehadiran virus dalam darah) dan PCR kuantitatif (membolehkan anda menentukan tahap aktiviti virus).

PCR berkualiti tinggi ditetapkan sekiranya terdapat kecurigaan terhadap jangkitan HBV, atau jika kaedah diagnostik lain tidak menghasilkan hasil yang jelas. Analisis PCR jenis ini sangat mudah untuk dijelaskan: negatif (tiada virus dikesan dalam darah), positif (dikesan dalam darah). Tugas utama analisis kualitatif adalah menentukan kehadiran sel yang dijangkiti pada peringkat awal penyakit. Jika virus itu didiagnosis dua minggu selepas jangkitan yang dikatakan, keberkesanan rawatan akan lebih tinggi. Jika virus dalam darah kira-kira dua bulan, penyakit itu menjadi kronik, oleh itu, tidak dapat sembuh sepenuhnya.

Jika diagnosis kualitatif mengesahkan kehadiran HBV dalam darah, doktor menetapkan analisis kuantitatif.

Analisis kuantitatif membolehkan menentukan perkembangan virus dalam tubuh pesakit. Analisis PCR jenis ini diberikan kepada:

• untuk menentukan peringkat penyakit;
• untuk memantau keberkesanan terapi yang digunakan;
• untuk menentukan tahap rintangan virus kepada ubat tertentu;
• untuk pemilihan dadah.

Penunjuk kuantitatif virus dalam darah diukur dalam IU per mililiter atau DNA per mililiter.

Jika doktor menetapkan diagnosis kuantitatif dengan segera, tanpa memeriksa kualiti, maka kadarnya ialah 75 IU setiap mililiter. Sekiranya kurang unit antarabangsa dikesan, hasilnya adalah bahawa HBV tidak dikesan apabila angka-angka di atas normal, kehadiran hepatitis B virus didiagnosis.

Tafsiran diagnosis kuantitatif

Petunjuk berikut (dalam salinan / mililiter) dianggap sebagai norma CRP dalam hepatitis B: kurang daripada 10 3 - virus tidak aktif; dari 10 4 hingga 10 5 - virus biasanya tidak aktif; 10 6 - virus aktif; 10 7 - virus dalam tahap tinggi aktiviti.

Berdasarkan penunjuk kuantitatif seseorang dapat menentukan dengan ketepatan 100% bentuk penyakit (pembawa, akut atau kronik), tindak balas virus untuk rawatan, keperluan diagnostik tambahan.

Bentuk kronik hepatitis B ditubuhkan sekiranya aktiviti virus adalah 10 5 keping setiap mililiter. Seorang pembawa didiagnosis jika markahnya berada di bawah 10 5 salinan setiap mililiter.

Dalam tempoh rawatan, adalah perlu untuk kerap (sekali setiap tiga bulan) mengulangi diagnostik kuantitatif untuk mempertimbangkan masa dalam masa apabila virus itu mengembangkan imuniti kepada ubat-ubatan yang digunakan dan mengubah kaedah itu. Sekiranya semua kajian telah dilakukan dengan betul dan rawatan yang berkesan telah dipilih, analisis yang berulang (selepas tiga hari rawatan) akan menunjukkan penurunan aktiviti sel patogen oleh sekurang-kurangnya lapan puluh lima peratus.

Biopsi hati dilakukan hanya dalam kes apabila enam bulan rawatan telah menunjukkan bahawa tahap ALT adalah dua kali lebih tinggi daripada biasa, dan diagnostik PCR menunjukkan kadar lebih rendah daripada 10 5 salinan setiap mililiter darah.

Menyediakan kajian

Darah Venous diperlukan untuk analisis. Untuk mendapatkan hasil yang paling tepat, perlu menyediakan prosedur: enggan mengambil makanan sekurang-kurangnya lapan jam sebelum pengumpulan darah; selama dua hari untuk menolak rawatan dadah (adalah penting untuk memberi amaran kepada doktor tentang mengambil dadah); anda mesti menghabiskan dua puluh minit dalam mod rehat sebelum menderma darah; Dua belas jam sebelum prosedur, melepaskan latihan sukan, minuman beralkohol, merokok dan makan makanan berlemak.

Adalah penting: jika diagnosis diperlukan untuk kanak-kanak di bawah umur lima bulan, maka dia perlu memberi segelas air rebus setiap sepuluh minit enam puluh minit sebelum prosedur pengumpulan darah.

Menyimpulkan

Analisis PCR untuk hepatitis B hari ini adalah kaedah yang paling tepat untuk mendiagnosis virus. Kaedah ini membolehkan untuk menentukan bentuk mutasi dan tersembunyi penyakit ini, untuk mendiagnosis penyakit pada hari-hari pertama jangkitan, oleh itu, untuk memilih rawatan yang paling berkesan. Pembantu makmal membandingkan keputusan analisa dengan norma, dan kemudian membawa mereka ke kesimpulan. Data diproses dalam masa dua minggu. Untuk mendapatkan rujukan untuk analisis PCR, adalah perlu untuk menghubungi pakar hepatologi, pakar penyakit berjangkit atau pakar virologi. Adalah penting untuk diingat bahawa lebih cepat anda mendapatkan doktor, lebih cepat hasilnya akan diperolehi, oleh itu, rawatan yang lebih berkesan adalah.

Kos pengujian darah dan PCR untuk hepatitis C

Hepatitis C adalah patologi radang di mana sel-sel hati terjejas. Penyakit ini berkembang akibat penembusan virus hepatitis C (HVC) ke dalam tubuh manusia.

Bentuk penyakit ini boleh menjadi akut atau kronik.

Selalunya, gejala-gejala patologi akut pada kebanyakan pesakit tidak hadir, kadang-kadang penyakit ini disertai oleh sensasi yang menyakitkan di perut, penurunan prestasi, keletihan yang meningkat, kehilangan selera makan, warna gelap urin, perubahan warna kotoran, kesedihan kulit dan membran mukus, sakit sendi. Gejala seperti biasanya berlaku 6-8 minggu selepas jangkitan, tetapi mungkin muncul selepas enam bulan.

Dengan perkembangan fenomena tersebut, adalah perlu untuk menghubungi institusi perubatan dan menjalani pemeriksaan komprehensif terhadap keseluruhan organisma. Sebagai sebahagian daripada peperiksaan perubatan, ujian darah untuk hepatitis C dilakukan.

Hari ini, dengan bantuan teknik diagnostik moden, patologi ini dapat dikenalpasti pada peringkat awal perkembangan, yang dengan ketara meningkatkan peluang penyembuhan penyakit yang lengkap.

Kumpulan berikut ini dikehendaki menguji hepatitis C:

• wanita dalam tempoh membawa kanak-kanak;
• orang yang mempunyai tanda-tanda hepatitis;
• kakitangan perubatan;
• penderma organ dan penderma yang berpotensi;
• penagih dadah, orang yang dijangkiti HIV, kehidupan intim yang rancak.

Senarai kajian yang diperlukan

Apakah ujian yang perlu saya ambil untuk hepatitis C? Untuk mendiagnosis penyakit dengan tepat, mengenal pasti punca-punca dan menentukan keadaan parenchyma hati, kajian-kajian berikut diperlukan:

• ujian air kencing umum dan darah;
• analisis biokimia darah;
• Analisis PCR;
• ujian darah untuk pengesanan antibodi kepada HVC;
• ujian darah untuk antibodi yang ada ke sel hati sendiri;
• biopsi hati.

Memecahkan ujian darah untuk hepatitis C dilakukan oleh pakar. Pertimbangkan setiap kaedah penyelidikan dengan lebih terperinci, dan kami akan fahami analisa hepatitis C yang paling tepat.

Analisis am

Apabila melakukan pengiraan darah lengkap untuk hepatitis C, anda boleh menilai keadaan pesakit. Perubahan dalam parameter darah tidak dianggap sebagai simptom spesifik hepatitis, bagaimanapun, dengan penyakit ini, terdapat gangguan seperti:

• kepekatan hemoglobin, platelet dan leukosit berkurangan;
• meningkatkan kandungan limfosit;
• pembekuan darah dilanggar;
• kadar pemendapan erythrocyte (ESR) meningkat.

Analisis umum air kencing memungkinkan untuk mengesan dalam komposisi urobelin - pigmen hempedu yang berlaku di dalam air kencing akibat daripada gangguan fungsi hati.

Analisis biokimia

Analisis biokimia darah dalam hepatitis C memungkinkan untuk mengenal pasti gangguan seperti:

• tahap enzim hati yang meningkat (alanine transaminase - ALT dan aspartate aminotransferase - AST), yang memasuki darah apabila hepatosit rosak. Dalam keadaan normal, penunjuk ini untuk lelaki tidak boleh melebihi 37 IU / l, untuk wanita - tidak lebih tinggi daripada 31 IU / l. Peningkatan kepekatan ALT dan AST dalam hepatitis C tanpa gejala sering merupakan satu-satunya gejala penyakit ini. Di samping itu, glutamil transpeptidase alkali fosfatase meningkat (biasanya tidak melebihi 150 IU / l).
• Kandungan bilirubin (kedua umum dan langsung) dalam darah melebihi. Sekiranya pigmen kuning dalam serum melebihi 27-34 μmol / l, penyakit kuning berlaku (sehingga 80 μmol / l dalam bentuk ringan, 86-169 μmol / l dalam keadaan yang agak teruk, di atas 170 μmol / l dalam bentuk yang teruk).
• Tahap albumin diturunkan, kepekatan gamma globulin, sebaliknya, meningkat. Gamma globulins terdiri daripada imunoglobulin - antibodi yang melindungi tubuh daripada bahan penyebab penyakit.
• peningkatan kepekatan trigliserida dalam darah.

Ujian PCR

Menggunakan teknik PCR, ada kemungkinan untuk mendiagnosis agen penyebab penyakit ini. Melakukan analisis ini memungkinkan untuk mengesan virus dalam darah, walaupun jumlahnya adalah minima. Analisis PCR untuk hepatitis C memungkinkan untuk menentukan jangkitan sedia ada dalam darah yang sudah selepas 5 hari dari saat jangkitan, iaitu sebelum lama muncul antibodi.

Sekiranya hasil ujian darah untuk hepatitis C oleh PCR adalah positif, ini menunjukkan adanya jangkitan aktif dalam tubuh. Dengan menggunakan kaedah ini, anda boleh menjalankan kajian kualitatif dan kuantitatif RNA HVC.

Semasa analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C, adalah mungkin untuk mengesan virus yang sedia ada di dalam tubuh manusia.

Prosedur diagnostik ini dilakukan jika anti-HVC dikesan dalam darah.

Memecahkan analisis untuk hepatitis C mengandungi maklumat bahawa jangkitan telah dikesan atau tidak dikesan di dalam badan. Biasanya, tiada bahan patologi yang terdapat di dalam darah.

Sekiranya ujian hepatitis C itu positif, itu bermakna patogen terus membahagikan dan menjangkiti sel-sel hati.

Keputusan analisis ini mungkin tidak boleh dipercayai, adalah mungkin dalam kes berikut:

• bahan biologi tercemar yang digunakan;
• di hadapan heparin dalam darah;
• dengan kehadiran bahan kimia atau protein (perencat) dalam biomaterial yang dikaji, yang mempengaruhi unsur-unsur PCR.

Analisis kuantitatif hepatitis C memberikan maklumat mengenai jumlah virus yang terkandung di dalam darah, iaitu, menentukan viral load. Oleh konsep ini bermakna jumlah RNA HVC hadir dalam darah (contohnya, dalam 1 ml). Dalam tafsiran analisis kuantitatif hepatitis C, nilai ini dinyatakan dalam kesamaan digital, diukur dalam IU / ml.

Darah untuk PCR untuk hepatitis C diambil sebelum langkah terapeutik. Selepas analisis dilakukan pada 1, 4, 12 dan 24 minggu. Kajian pada minggu 12 adalah menunjukkan dan sedang dijalankan untuk menilai keberkesanan prosedur terapeutik.

Jika ujian untuk hepatitis C semasa kehamilan adalah positif dan nilai-nilai beban virus melebihi, risiko penghantaran patogen dari ibu yang sakit kepada kanak-kanak itu meningkat beberapa kali. Selain itu, dengan beban virus yang tinggi, pelaksanaan langkah-langkah terapeutik adalah sukar.

Menurut transkrip ujian untuk hepatitis C, jika nilai viral load melebihi 800,000 IU / ml, maka itu tinggi. Sekiranya angka di bawah 400,000 IU / ml, paras viral load dianggap rendah.

Analisis hepatitis C oleh PCR dianggap paling tepat dan mempunyai beberapa kelebihan terhadap pilihan penyelidikan lain, iaitu:

• diagnosis langsung dari agen penyebab penyakit ini. Apabila melakukan kajian tradisional ditentukan oleh kehadiran penanda protein yang merupakan produk sisa patogen. Ini hanya menunjukkan bahawa jangkitan ada di dalam darah. Apabila ujian untuk hepatitis C oleh PCR, adalah mungkin untuk menentukan jenis patogen patologi berbahaya.
• kekhususan teknik. Semasa prosedur ini, rantau DNA unik ditentukan dalam biomaterial yang sesuai dengan hanya satu jenis patogen. Ini mengurangkan kemungkinan hasil palsu.
• kepekaan yang tinggi. Apabila melakukan analisis PCR, anda dapat mengesan jumlah minimum virus. Ini penting jika bahan-bahan patogen yang kondusif dikenal pasti yang menimbulkan ancaman hanya jika tahap mereka meningkat.
• Apabila menggunakan teknik ini dalam satu sampel biomaterial, beberapa patogen boleh dikesan sekaligus.
• boleh mengesan jangkitan tersembunyi. Di samping itu, analisis ini membolehkan anda untuk mendiagnosis mikroorganisma patogen yang hidup di dalam sel dan mempunyai variasi antigen yang tinggi.

Sekiranya keputusan ujian positif, maka jejak virus dijumpai dalam biomaterial, maka rangkaian itu mempunyai jangkitan di dalam badan.

Analisis PCR negatif untuk hepatitis C bermakna tiada jejak jangkitan dalam biomaterial.

Kajian imunologi

Kaedah ini membolehkan anda mengenal pasti antibodi untuk semua jenis virus hepatitis, serta antibodi ke sel hati badan anda sendiri, rupa yang menyumbang kepada pembangunan hepatitis autoimun.

Hasil yang diperolehi semasa kajian ini adalah berkaitan selama 3 bulan, maka anda perlu menderma darah untuk hepatitis C.

Ia juga mungkin untuk melakukan kajian ekspres menggunakan jalur ujian khas. Analisis ini memungkinkan untuk menentukan antibodi kepada virus C dalam komposisi darah dan air liur. Prosedur ini boleh dijalankan secara bebas, di rumah.

Biopsi hati

Untuk melakukan analisis ini, satu unsur parenkim hati diambil dan pemeriksaan histologi biomaterial yang diperoleh dilakukan. Ini membolehkan anda menilai keadaan badan: untuk mengenal pasti keradangan, rahim nekrotik, peringkat fibrosis dan sebagainya.

Hari ini, ujian yang menggantikan analisis histologi parenchyma hepatik digunakan.

Untuk menilai tahap kerosakan hati dan intensiti proses keradangan, biomarker darah vena tertentu digunakan. Menggunakan Fibrotest, anda boleh menganggarkan tahap pertumbuhan tisu berserabut.

Apabila melakukan Actitest, anda boleh mendapatkan maklumat mengenai intensiti proses patologi dalam parenchyma hati. Menggunakan Steatototesta boleh mendiagnosis tisu lemak hati dan menilai tahap proses ini. Fibromax terdiri daripada semua ujian di atas dan mungkin termasuk beberapa kajian lain.

Persediaan untuk kajian ini

Ujian apa yang diambil untuk hepatitis C dan bagaimana kita mengetahui jenis atau jenis penyelidikan ini. Sama pentingnya untuk mengetahui bagaimana untuk menyediakan analisis.

Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, adalah disyorkan untuk mematuhi keperluan berikut:

• Ujian hepatitis C mesti diambil pada waktu pagi, dengan perut kosong. Makanan masa lalu harus dimakan sekurang-kurangnya 8 jam sebelum kajian.
• Bahan biomas boleh dikumpulkan pada waktu siang atau petang. Dalam kes ini, adalah penting bahawa sekurang-kurangnya 5-6 jam lulus antara makanan terakhir dan analisis.
• sebelum menderma darah untuk hepatitis C, teh, kopi, jus atau minuman lain harus dibuang, hanya air yang dibenarkan.
• 48 jam sebelum kajian, adalah perlu untuk mengecualikan penggunaan lemak, makanan goreng dan minuman yang mengandungi alkohol.
• sekurang-kurangnya sejam sebelum analisis, anda mesti menahan diri dari merokok.
• analisis tidak boleh dilakukan dengan segera selepas ultrasound, instrumen, pemeriksaan sinar-X, sesi urut atau fisioterapi.
• satu hari sebelum pelaksanaan kajian itu, ia dikehendaki mengecualikan penggunaan dadah dan aktiviti fizikal yang intensif. Tekanan emosi juga kontraindikasi.
• Adalah disyorkan untuk menghabiskan masa 15 minit sebelum melakukan kajian dalam keadaan tenang.

Menjalankan prosedur pengumpulan darah

Di mana untuk mendapatkan ujian untuk hepatitis C? Bahan biologi diambil untuk penyiasatan lanjut di makmal institusi perubatan atau di rumah pesakit.

Darah dari urat diambil seperti berikut:

• menggunakan tourniquet khas yang dibalut di lengan bawah pesakit, aliran darah vena dihentikan. Terima kasih kepada manipulasi seperti itu, urat darah akan diisi dengan darah dan akan lebih kelihatan, yang akan memudahkan proses memasukkan jarum.
• kawasan kulit di mana jarum akan dimasukkan dengan berhati-hati dengan alkohol atau alkohol yang mengandungi cecair.
• Jarum perlahan dimasukkan ke dalam urat, maka tiub ujian dilampirkan padanya, yang direka khusus untuk mengumpul darah.
• Sejurus selepas jarum dimasukkan ke dalam vena, abah-abah memerah dikeluarkan dari lengan pesakit.
• selepas jumlah darah yang diperlukan untuk analisis dikumpulkan, jarum dikeluarkan dengan perlahan daripada vena.
• Pad kapas kapas atau kain kasa steril yang dibasahkan dengan alkohol mestilah digunakan di tapak suntikan.
• untuk mencegah terjadinya hematoma, tampon perlu ditekan dengan beberapa usaha menentang kawasan memasukkan jarum, bengkokkan lengan pada sendi siku dan tahan di kedudukan ini selama beberapa minit. Tindakan sedemikian juga membantu menghentikan darah lebih cepat.

Dengan syarat bahawa teknik pentadbiran dalaman adalah baik, prosedur ini benar-benar selamat dan tidak menyebabkan sensasi yang menyakitkan.

Dalam kes yang jarang berlaku, selepas pengumpulan darah, urat mungkin membengkak. Fenomena ini dipanggil "phlebitis." Memampatkan (tidak panas) akan membantu menyelesaikan masalah, ia perlu digunakan untuk membengkak kawasan kulit beberapa kali sehari.

Masalah tertentu juga mungkin berlaku jika terdapat gangguan pendarahan. Mengambil aspirin, warfarin dan penipisan darah lain boleh menyebabkan pendarahan. Itulah sebabnya sebelum melakukan analisis itu diperlukan untuk menolak mengambil ubat. Jika rawatan tidak dapat dibatalkan, anda harus memaklumkan kepada pakar.

Tarikh dan harga

Berapa banyak yang diuji untuk hepatitis C? Hasil tes darah untuk hepatitis dapat siap dalam beberapa jam, dan dalam beberapa hari (biasanya tidak lebih dari 8 hari). Tempoh penyediaan keputusan bergantung kepada jenis virus dan kaedah analisis yang dipilih. Lebih cepat adalah kajian yang dijalankan oleh kaedah PCR. Keputusan dalam kes ini akan siap dalam beberapa jam saja.

Berapakah kos ujian hepatitis C? Bergantung pada klinik dan kerumitan kajian, harga prosedur boleh berubah dari 400 hingga 11,000 rubel.

Anda perlu sedar bahawa ia mungkin mengambil masa beberapa minggu untuk membentuk jumlah antibodi yang mencukupi untuk HVC. Oleh itu, pada peringkat awal dalam perkembangan patologi, hasil kajian boleh menjadi negatif palsu.

Di samping itu, mendapatkan data yang tidak boleh dipercayai adalah mungkin dengan analisis kualiti yang kurang baik dan pelanggaran syarat-syarat pengangkutan biomaterial yang diperolehi (sampel mesti dihantar ke makmal maksimum 2 jam selepas sampel darah).

Sekiranya hasil kajian adalah positif, anda perlu segera menghubungi doktor penyakit berjangkit. Pakar akan menjalankan pemeriksaan tambahan dan menetapkan rawatan yang sesuai.

Intipati analisis PCR untuk hepatitis B dan hasilnya

Hepatitis B virus berjaya dirawat jika ia dikesan dalam masa dan jumlah antibodi dan antigen dalam darah pesakit ditentukan dengan betul. Dengan bantuan immunoassay enzim untuk hepatitis, adalah mungkin untuk mengesan kehadiran penanda virus, tetapi mereka tidak dapat menentukan tahap proses yang tepat.

Untuk penilaian kuantitatif yang menggunakan diagnostik PCR. Menggunakan ujian ini, adalah mungkin untuk mengira bilangan penanda, meramalkan perjalanan penyakit dan kemungkinan penawar dengan bantuan ubat antiviral.

Kelebihan utama kajian ini ialah keupayaan untuk mengesan kepekatan minimum virus, untuk mengenal pasti patogen pada peringkat spesies.

Diagnosis Hepatitis B

Virus Hepatitis B sangat menular dan tahan kepada pengaruh luaran. Ia tetap aktif dalam darah pesakit selama beberapa minggu. Oleh itu, setiap orang berisiko jangkitan, walaupun profilaksis diperhatikan.

Untuk mendiagnosis penyakit itu menetapkan kajian berikut:

Intipati kaedah PCR

Ahli kimia Amerika K.Mullis menerima Hadiah Nobel, dan kaedah diagnostiknya masih digunakan.

Anak lelakinya kaedah PCR (tindak balas rantai polimerase) dianggap sebagai saintis dari Norway H. Kleppe. Dia pertama kali mula melakukan amplifikasi (pemulihan) DNA menggunakan rangkaian DNA yang pendek, iaitu, primer sintetik (jenis salinan).

Walau bagaimanapun, saintis gagal menyedari ideanya. Kajian serupa dibuat oleh ahli kimia Amerika K.Mullis, yang pada tahun 1993 dianugerahkan Hadiah Nobel untuk ciptaannya. Sejak itu, PCR telah digunakan untuk menubuhkan paterniti, mendiagnosis penyakit genetik, dan mengesan virus.

Inti dari tindak balas ini adalah dengan bantuan enzim sekeping DNA tertentu yang disalin. Anda hanya boleh menyalin kawasan yang sepadan dengan parameter yang ditentukan dan jika ia dalam sampel yang dibentangkan. Komponen berikut digunakan untuk memulakan reaksi:

1. DNA Matriks dengan tapak yang akan disalin.
2. Primer serupa dalam struktur kepada DNA.
3. Polimerase, iaitu enzim yang mencetuskan reaksi. Ia perlu termostable, iaitu, untuk menahan keterlaluan suhu.
4. Penyelesaian dengan parameter tertentu, memastikan laluan reaksi.

Reaksi dilakukan dalam beberapa peringkat:

Untuk pengesanan hepatitis B, dua jenis tindak balas digunakan: kuantitatif dan kualitatif.

PCR kuantitatif

Kaedah kuantitatif menentukan jumlah genom HBV

PCR kuantitatif melibatkan penciptaan serpihan serpihan DNA dan penentuan bilangan molekul. Pengukuran dilakukan selepas setiap peringkat, iaitu, dalam masa nyata. Ini dicapai dengan menggunakan kuar pendarfluor, yang termasuk dalam rangkaian molekul dan cahaya dalam tempoh tertentu kajian.

Kaedah ini digunakan untuk mengesan serpihan DNA yang merupakan penanda virus hepatitis. Menggunakan kaedah kuantitatif, adalah mungkin untuk mengasingkan genotip virus secara tepat. Dengan kata lain, bilangan salinan genom HBV bagi setiap nombor sel pesakit dikira.

Analisis kuantitatif memberikan jawapan kepada soalan berikut:

1. Dengan intensiti apa yang berlaku penyakit itu.
2. Betapa berkesannya rawatan.
3. Adakah rintangan dadah berkembang?

Juga, ukuran kuantitatif diperlukan untuk diagnosis tahap kronik jangkitan. Sekiranya jumlah DNA adalah di bawah 100 pcs / ml pada paras transaminase biasa, maka orang itu adalah pembawa virus.

Dalam fasa akut, jumlah antibodi lebih tinggi. Dalam terapi antiviral, peningkatan jumlah antibodi menunjukkan perkembangan rintangan dadah, ini merupakan isyarat untuk menyesuaikan rawatan.

PCR berkualiti tinggi

PCR berkualiti tinggi memberikan maklumat kurang, tetapi boleh menghapuskan jangkitan.

PCR berkualiti tinggi hanya boleh mewujudkan kehadiran patogen dalam darah. Jika mereka tidak hadir, pesakit tidak dijangkiti, jika patogen memasuki darah, hasilnya akan positif.

Walau bagaimanapun, dengan bantuan tindak balas kualitatif, mustahil untuk menjelaskan genom virus, peringkat penyakit ini. Oleh itu, untuk diagnosis HBV dilakukan pengukuran kuantitatif dan kualitatif.

Menyediakan kajian

Darah Venous diperlukan untuk analisis PCR. Ini mesti dilakukan pada waktu pagi pada perut kosong.

Pesakit harus bersiap sedia untuk kajian:

1. Selama 10 jam untuk menolak makanan, anda hanya boleh minum air bersih.
2. Pada malam berhenti mengambil alkohol, selama 4 jam tidak merokok.
3. Sebelum peperiksaan harus mengelakkan tekanan fizikal dan emosi.
4. Berhenti menggunakan ubat selama 2 hari, jika ini tidak mungkin, adalah perlu untuk memberitahu juruteknik makmal. Beberapa ubat mempunyai kesan ke atas hasil akhir.

Tafsiran data

Dalam tindak balas kuantitatif, penunjuk yang diperolehi dinilai berdasarkan bilangan salinan DNA.

Ia mudah untuk mentafsirkan data pengukuran yang berkualiti. Dia memberikan jawapan positif atau negatif.

Dalam tindak balas kuantitatif, adalah mungkin untuk menilai penunjuk yang diperolehi bergantung kepada bilangan salinan DNA. Unit ukuran adalah salinan / ml.

Data dikodkan seperti berikut:

1. Jika jumlah DNA HBV kurang daripada 90, maka jangkitan tidak hadir. Pesakit membangun imuniti selepas vaksinasi, atau dia sembuh penyakitnya.
2. Apabila bilangan salinan 2x100 bercakap tentang pembawa virus.
3. Nombor 2x106 menunjukkan tahap penyakit kronik.
4. Dengan DNA lebih daripada 2x109, pesakit mempunyai tahap hepatitis akut.

Keputusan yang salah

Kelebihan kaedah diagnostik yang menggunakan tindak balas polimerase adalah seperti berikut:

1. Pengesanan langsung patogen. Sebaliknya, ELISA menyediakan maklumat mengenai kehadiran antibodi kepada virus.
2. Spesifikasi. Iaitu, rantau DNA yang terdapat dalam sampel biomaterial yang disalin.
3. Hypersensitivity. Kaedah ini juga dapat mengesan serpihan sel tunggal.
4. Diagnosis penyakit di peringkat akut dan laten. Iaitu, adalah mungkin untuk mendiagnosis penyakit di peringkat manifestasi prasasti.

Kaedah ini mempunyai kelemahan yang mengakibatkan hasil palsu. Kelemahan yang paling penting ialah kebarangkalian pencemaran bahan. Sumber pencemaran utama adalah tiub ujian yang tidak diproses, tangan makmal, reagen.

Sebahagian daripada DNA dari tindak balas sebelumnya dapat memasuki darah. Oleh itu, peningkatan keperluan sanitari dikenakan ke atas makmal: bilik berasingan, tiub plastik, rawatan ultraviolet makmal, dan sebagainya.

Keputusan negatif palsu mungkin disebabkan oleh sensitiviti yang dikurangkan tindak balas. Ini berlaku dalam situasi berikut:

• pesakit sedang mengambil ubat, sebagai contoh, antikoagulan;
• orang itu mengalami tekanan fizikal sebelum analisis (bermain sukan, kerja keras);
• jangkitan telah berlaku baru-baru ini.

Sekiranya pesakit mempunyai kebarangkalian jangkitan yang tinggi, dan hasil kajiannya negatif, dia perlu diperiksa semula.

Lihat juga:

Kesimpulannya

Kaedah tindak balas rantai polimer adalah utama dan paling bermaklumat untuk diagnosis HBV. Ia tidak hanya membenarkan status pembawa jangkitan, tetapi juga untuk menjelaskan peringkat penyakit, untuk menilai hasil rawatan.

Untuk diagnosis yang lebih tepat, pengukuran kualitatif dan kuantitatif digunakan. Kelemahan kaedah ini termasuk kebarangkalian pencemaran, kepekaan berkurangan dan harga yang agak tinggi.

Agar hasilnya dapat dipercayai, seseorang harus mempersiapkan diri dengan betul untuk mengkaji dan menjalankannya di klinik dengan lesen yang sesuai dan reputasi yang baik.

Mengendalikan analisis PCR untuk hepatitis C dan penyahkodan keputusan

Analisis PCR Hepatitis C adalah kajian yang tujuan utamanya adalah mengenal pasti bahan genetik agen penyebab. Analisis mendedahkan agen penyebab penyakit ini dengan menggunakan tindak balas rantai polimerase. Diagnosis ini mempunyai ketepatan yang tinggi, kekhususan untuk mengesan ketiadaan atau kehadiran jangkitan virus.

Intipati diagnosis

Untuk menjalankan analisis PCR untuk menentukan virus hepatitis C dari pesakit, darah vena diambil, yang berpotensi mengandungi HCV RNA (asid ribonukleat) virus yang dikehendaki.

Ujian PCR untuk Hepatitis C membayangkan prosedur untuk menambah zarah darah pesakit:

• primer (kawasan sintetik pendek sintetik gen yang diperlukan);
• enzim khas (polimerase RNA).

Selepas pensampelan, bahan biologi dihantar untuk penyelidikan ke makmal. Satu bahagian darah diperlukan untuk analisis PCR langsung, yang kedua dihantar untuk ujian oleh ELISA. Enzim mampu dalam masa yang singkat untuk meningkatkan jumlah bahan genetik virus patogen tersebut. Dalam alat khas, beberapa kitaran haba dan proses penyejukan dijalankan. Pada peringkat akhir, bahan yang diperolehi dibandingkan dengan gen virus dan kesimpulan dibuat tentang kehadiran atau ketiadaan patologi dalam tubuh pesakit.

Intipati dan menjalankan analisis PCR di makmal. Dilakonkan oleh SiberianMedicalLaboratory.

Jenis penyelidikan

Terdapat 3 jenis diagnostik, yang memungkinkan untuk menentukan kehadiran virus hepatitis C dalam tubuh manusia:

• genotyping;
• kualiti;
• kuantitatif.

Kaedah kualitatif

Diagnosis hepatitis C dengan kaedah kualitatif boleh digunakan untuk pesakit di mana antibodi terhadap virus dikesan dalam ujian darah. Dalam kes kehadiran fasa akut RNA HCV, langkah diagnostik sedemikian boleh menentukan kehadiran penyakit itu dalam masa 1-2 minggu selepas jangkitan. Dalam tempoh ini, antibodi untuk hepatitis C mungkin belum dikembangkan.

Kaedah kuantitatif

Kaedah diagnostik kuantitatif digunakan untuk menentukan kepekatan virus dalam sampel darah. Ujian sedemikian untuk viremia (tahap kepekatan) menjadikannya mungkin untuk menentukan bilangan unit RNA virus secara tepat. Hasil akhir dinyatakan dalam jumlah yang sama. Jika kita bercakap mengenai analisis kuantitatif, maka penunjuk diukur dalam 1 ml (1 cub. Cm).

Parameter beban virus bermaksud tahap penyakit menular, iaitu, ia mencerminkan tahap "penularan" pesakit. Dalam praktiknya, ini bermakna bahawa semakin tinggi kepekatan virus dalam darah, semakin besar peluang untuk pesakit menginfeksi orang lain dengan hepatitis C. Kaedah penyelidikan kuantitatif juga membolehkan anda untuk membuktikan kualiti dan keberkesanan rawatan.

Genotyping

Genotyping mendedahkan mutasi agen penyebab penyakit ini. Sebelum menetapkan pelan rawatan, genotip virus ditentukan: kualiti dan tempoh terapi bergantung kepadanya. Sebagai contoh, dalam rawatan jenis penyakit I, kecekapan adalah 60%, dalam kes II, III-jenis - kira-kira 80%.

Manfaat Analisis PCR Hepatitis

Antara kelebihan utama prosedur ialah:

1. Kemungkinan diagnosis awal. Analisis PCR dapat mengesan kehadiran virus pada peringkat awal jangkitan.
2. Hasil ralat rendah. Sumber biologi yang dikaji membolehkan anda mendiagnosis seksyen bahan genetik yang merupakan ciri hanya satu jenis jangkitan virus. Keadaan ini membolehkan untuk mengelakkan keputusan diagnostik palsu.
3. Tahap kepekaan tinggi. Analisis PCR dapat mengesan RNA virus dalam kuantiti yang kecil, yang juga memungkinkan untuk menjejaki jangkitan laten pada waktunya.

Petunjuk untuk

Ujian untuk PCR untuk hepatitis C adalah perlu, jika ada:

• mempunyai hubungan dengan orang yang sakit, yang boleh menyebabkan jangkitan;
• gejala sirosis hati (pembesaran limpa, perubahan tidak normal dalam saiz hati, pengesanan plexus vena pada abdomen di bawah kulit);
• keputusan positif ELISA;
• peningkatan aktiviti AST dan ALT (ditunjukkan dalam analisis biokimia darah);
• keperluan untuk mengawal kelakuan terapi antiviral;
• peringkat awal rawatan untuk keperluan untuk menubuhkan viral load;
• menjalankan peringkat akhir terapi untuk mengecualikan kemungkinan pengulangan;
• pesakit mempunyai hepatitis B untuk menolak pembangunan kerosakan hati yang bercampur.

Bagaimana untuk menyediakan derma darah untuk penyelidikan PCR

Persediaan untuk analisis PCR merangkumi cadangan berikut:

• darah diambil pada waktu pagi;
• analisis dilakukan pada perut kosong, jadi disarankan untuk berehat antara pengambilan makanan terakhir 8-10 jam;
• beberapa hari sebelum diagnosis harus dikecualikan makanan berlemak, pedas dan goreng, minuman beralkohol dan merokok;
• satu hari sebelum analisis seseorang harus menahan diri daripada melakukan senaman berat, tidak termasuk kelas di gym atau kolam renang.

Hasil analisis: norma dan penyimpangan

Analisis itu sendiri bukanlah jangka panjang, dan ahli hepatologi pakar yang berkelayakan atau pakar penyakit berjangkit menyuraikan keputusan PCR untuk hepatitis C. Berdasarkan keputusan analisis, pesakit didiagnosis.

Untuk menguraikan hasil kaji selidik dengan betul, mereka mengambil kira penunjuk:

• analisis biokimia darah;
• data ultrasound;
• hasil biopsi.

Tafsiran analisis kuantitatif

Apabila memperoleh keputusan analisis kuantitatif PCR, petunjuk berikut akan diambil kira:

Diagnostik PCR untuk hepatitis C

Hepatitis C adalah keradangan sel-sel hati yang berlaku akibat jangkitan dengan virus HCV (hepatitis C) melalui kontak dengan darah orang yang dijangkiti. Kod genetik flavivirus HCV dibawa oleh molekul RNA (ribonuclenic acid) yang terkandung dalam struktur virus. Fenomena yang mengancam nyawa ini dibezakan dengan kerahsiaan pada peringkat awal patologi. Selang masa antara jangkitan dan permulaan simptom (tindak balas sistem imun) boleh dari satu bulan hingga enam bulan. Sebagai peraturan, penyakit itu mengambil bentuk kronik dan sukar untuk menyembuhkan.

Perubatan moden membolehkan anda mendiagnosis patologi dengan kerosakan hati yang kecil. Kaedah diagnostik yang paling biasa dan berkesan termasuk analisis PCR. Pertimbangkan dalam artikel ini apa yang ada dan apa jenisnya.

Apakah kajiannya?

Analisis PCR untuk hepatitis C adalah pemeriksaan makmal yang mengesan flavirus, bahan genetik ribonuclelenic acid (RNA). Ia menentukan bilangan molekul RNA dalam darah, kualiti bahan biologi, jenis genetik flavirus HCV.

Kaedah PCR untuk hepatitis C memungkinkan untuk mengesan jumlah minimum flavirus sebelum pembentukan antibodi, sebagai peraturan, tidak lama selepas jangkitan.

Kajian ini sering disebut sebagai analisis RNA, kerana ia mengesan zarah-zarah asid ribonukleat yang mempunyai ukuran 30-60 nm yang terkandung dalam flavavirus.

Kajian ini dijalankan seperti berikut: pada perut kosong, pesakit memberikan darah dari vena, yang kemudiannya diuji dengan pelbagai kaedah:

• PCR Masa Nyata dilakukan secara automatik tertutup dan mempunyai had yang lebih rendah untuk mengesan virus RNA, sama dengan 15 IU / ml;
• COBAS AMPLICOR dengan kepekaan 50-100 IU / ml.

Semakin tinggi kepekaan teknik diagnostik, semakin besar peluang untuk mencari kandungan virus paling rendah dalam bahan biologi yang sedang disiasat.

Apakah jenis analisis yang digunakan

Analisis yang telah berjaya digunakan selama beberapa dekad dipanggil hepatitis PCR, dan ia dapat dikesan dengan mudah dan cepat. Dalam bidang perubatan, terdapat dua kaedah reaksi, yang secara asasnya berbeza antara satu sama lain:

• kaedah kualitatif mendedahkan kehadiran dalam bahan biologi sumber genetik virus tertentu;
• analisis kuantitatif mengukur bilangan perkara genetik, yang membolehkan menentukan tahap patologi atau menilai keberkesanan kursus terapeutik;
• genotyping menentukan jenis virus yang terdapat di dalam badan.

Secara umum, ujian darah membantu mengenal pasti sifat viremia dan jenis genetik patogen. Sebagai peraturan, penyelidikan dijalankan 1 kali bergantung pada tahap kepekaan sistem diagnostik. Sekiranya perlu, ujian semula dilakukan menggunakan reagen ultrasensitif.

PCR berkualiti tinggi

Apakah RNA PCR berkualiti tinggi untuk hepatitis C? Inti dari tindak balas terletak pada kehadiran urutan hepatitis RNA, dan reaksi hanya mungkin di hadapan protein virus etimologi serupa dalam ELISA. Dalam proses perbandingan, beban dan kemungkinan kerosakan pada kawasan hati dikesan.

Ciri tersendiri kaedah ini adalah keupayaan untuk mengesan walaupun kehadiran gen berasingan.

Harus diingat bahawa setelah menerima keputusan ujian PCR dan ELISA, pesakit memerlukan rawatan yang sesuai, tanpa mengira hasil imunoassay terakhir. Positif menunjukkan jangkitan, dan negatif PCR menunjukkan bilangan zarah virus yang berkurangan berbanding tahap kepekaan.

Terdapat beberapa syarat yang mempengaruhi pengeluaran PCR negatif dan ELISA:

• kekurangan syarat pengumpulan bahan yang sesuai;
• analisis yang dihasilkan mengandungi pencemaran;
• dalam kes suntikan awal heparin kepada pesakit.

Pesakit tidak perlu mengikuti peraturan tertentu untuk sampel darah untuk analisis PCR, dalam hal ini kualitas analisis ini bergantung pada profesional medis yang melakukan prosedur. Keupayaan untuk menubuhkan kehadiran penyakit (terutama dalam bentuk akut) muncul dalam masa beberapa minggu selepas jangkitan.

Analisis kuantitatif

Ujian kuantitatif adalah disyorkan untuk mengesan beban virus sebaik sebelum pembentukan terapi selanjutnya dan tindak balas badan. Proses pensampelan darah dilakukan dengan cara yang sama dengan PCR dan ELISA yang berkualiti tinggi, satu-satunya keadaan adalah ketiadaan kemungkinan merokok pesakit sebelum prosedur.

Berkenaan dengan ciri-ciri yang diperolehi daripada kajian data, peningkatan beban dicirikan oleh petunjuk dari 800000 IU / ml, rendah - 400000 IU / ml. Kehadiran virus dalam tubuh pesakit ditunjukkan oleh PCR untuk hepatitis bukan ujian kualitatif negatif.

Penyelidikan semacam ini memungkinkan untuk menentukan betapa berbahayanya pesakit kepada orang di sekelilingnya. Sebagai contoh, mengenal pasti tahap yang tinggi menunjukkan peningkatan jangkitan pesakit. Di samping itu, hasil analisa membantu merumuskan rawatan yang paling berkesan dan menentukan berapa banyak terapi yang sedia ada dianggap berkesan.

Sambutan negatif cepat ujian menunjukkan kejayaan teknik yang dipilih, dan lambat menunjukkan keperluan untuk penyesuaian dan penggunaan pelbagai rawatan.

Proses mengambil prosedur analisis bergantung pada hari tertentu dari penyakit ini. Penentuan pertama dilakukan pada hari pertama selepas pesakit dimasukkan ke hospital, maka prosedur itu diulangi pada 4, 12 dan 24 minggu setelah mengambil ubat.

Oleh itu, analisis kuantitatif menunjukkan rawatan yang paling berkesan, tempoh terapi yang tersedia dan bahaya pesakit yang berkaitan dengan orang lain.

Genotyping

Dalam kajian analisis bahan, adalah penting untuk menentukan ketepatan genotip virus yang berlaku. Pada masa ini, terdapat 11 jenis virus hepatitis C, yang pada gilirannya termasuk subspesies tertentu.

Semua spesies ini bertindak balas berbeza dengan rawatan yang berbeza, dengan jenis individu benar-benar tahan terhadap banyak ubat.

Genotip ini memungkinkan untuk menentukan dan menunjukkan keadaan hati. Ia bukan perkara biasa untuk keputusan "tidak ditaip" dalam hasilnya, yang bermaksud bahawa virus dalam darah pesakit tidak dikesan oleh sistem ujian ini. Ini boleh dikesan jika genotip tertentu tidak sepadan dengan zon ini. Dalam situasi sedemikian, analisis diambil berulang-ulang, dan sistem yang lebih sensitif digunakan untuk mengkaji bahan tersebut.

Kaedah Ultra Sensitif

Kaedah ultrasensitif diperlukan dalam kes-kes tertentu apabila diagnosis hepatitis tidak dapat dilakukan oleh kaedah lain, pada saat yang sama, bila lulus analisis ditentukan oleh dokter yang hadir:

• jika anda mengesyaki kehadiran virus hepatitis C pada pesakit dengan pelbagai penyakit tersembunyi;
• kehadiran antibodi terhadap virus hepatitis C, tidak disahkan oleh diagnostik PCR;
• untuk menentukan kualiti keberkesanan kaedah rawatan yang dipilih, dan mengesahkan penghapusan penyakit.

Kepekaan kaedah ini jauh lebih tinggi daripada yang biasa digunakan, bagaimanapun, kaedah ini tidak mengecualikan hasil palsu, baik positif dan negatif. Dalam keadaan sedemikian, penting untuk mengawal kualiti prosedur dan kemungkinan pencemaran bahan itu sendiri.

Penjelasan analisis PCR

Penyahkodan analisis dilakukan berdasarkan bahan yang dibentangkan, sementara hasil penelitian laboratorium termasuk data tertentu yang dijelaskan di atas.

Transkrip boleh termasuk tindak balas rantai polimer PCR positif dan ELISA negatif dalam ujian, yang bermaksud bahawa pesakit tidak mempunyai tanda-tanda hepatitis C dalam darah, tetapi pada masa lalu ia telah memindahkan bentuk penyakit akut. Sebagai peraturan, apabila mendiagnosis, pakar menggunakan penunjuk ujian PCR.

Merumuskan semua perkara di atas, dapat disimpulkan bahawa semasa analisis adalah penting untuk mematuhi semua peraturan dan saranan supaya hasil yang diperoleh adalah setepat mungkin, dan berdasarkan data yang diperoleh adalah mungkin untuk menentukan keberkesanan terapi yang digunakan dan kesempatan selanjutnya pemulihan penuh.

Analisis PCR untuk Hepatitis C

Untuk diagnosis "hepatitis C virus kronik (CVHS)" memerlukan pemeriksaan komprehensif terhadap orang itu, termasuk kajian klinikal, makmal dan instrumental. Penting dari sudut pandangan diagnosis untuk diagnosis yang betul adalah kaedah PCR - tindak balas rantai polimerase.

Apakah analisis ini menunjukkan dan mengapa ia diperlukan?

Kaedah makmal ini mengesan RNA virus hepatitis C dalam darah manusia. Bersama dengan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) untuk antibodi kepada virus, PCR digunakan untuk membuat diagnosis CVHC dan genotip patogennya. Penyelidikan ini merupakan salah satu kaedah terbaru diagnostik makmal. Kebolehpercayaannya pada CVHS melebihi 97%, yang dianggap penunjuk yang sangat baik untuk penyelidikan.

Terdapat tiga ujian darah PCR untuk CVHS: genotip kualitatif, kuantitatif dan virus. Kajian pertama (analisis kualitatif) virus mengesannya dalam darah, dan oleh itu hanya digunakan untuk diagnosis.

Kajian kedua (kuantitatif) menentukan tahap viral load pada tubuh, oleh itu, digunakan untuk memantau keberkesanan terapi.

PCR ketiga (genotip) menjelaskan diagnosis, mewujudkan genotip virus, yang sangat penting untuk pelantikan rawatan antiviral yang betul.

Inti dari teknik tindak balas rantai polimerase ialah penggunaan enzim yang membiak bahan genetik patogen dalam biomaterial. Dalam proses replikasi tersebut, tiub dengan darah dipanaskan beberapa kali dan disejukkan kepada suhu yang diperlukan untuk mempercepatkan reaksi enzim. Hasil daripada manipulasi ini, jumlah genom virus meningkat banyak kali, membolehkan ia dikesan walaupun dengan jumlah minimum.

Diagnostik PCR mempunyai banyak kelebihan berbanding ujian makmal yang lain:

• kepekaan tinggi - 97-98%;
• menjamin spesifik analitik (mendedahkan tepat patogen yang anda mahu cari, dan bukannya berkaitan dengannya);
• kelajuan menjalankan (ia tidak mengambil masa lebih daripada 2 hari untuk mendapatkan kesimpulan).

Tiga jenis ujian PCR

Analisis PCR berkualiti tinggi diberikan kepada semua pesakit yang mana analisis ELISA mengesan antibodi kepada virus HVGS. Selepas menjalankan PCR berkualiti tinggi, dua pilihan tindak balas boleh diperolehi: "RNA dikesan" atau "RNA tidak dikesan." Untuk mengesan jumlah minimum virus dalam darah, sistem ujian dengan kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml diperlukan. Sekiranya kepekatan virus dalam darah pesakit kurang daripada diagnostik boleh menentukan, hasil kajian mungkin negatif palsu. Untuk mengelakkan ralat diagnostik sedemikian, makmal yang menjalankan diagnostik PCR perlu disediakan dengan sistem ujian yang sensitif. Di makmal "Invitro", sebagai contoh, ujian dengan kepekaan 15 IU / ml digunakan. Pekerja-pekerja makmal wajib memberikan maklumat mengenai kepekaan ujian kepada pesakit dan doktor atas permintaan pertama mereka.

Analisis kuantitatif PCR menentukan tahap viremia, iaitu kepekatan patogen dalam darah, beban virus. Hasil kajian ini, berbanding dengan PCR berkualiti tinggi, dinyatakan dalam angka, misalnya, 2 × 10 * 6 IU / ml, yang berarti 2 juta unit internasional dalam 1 ml darah. Beberapa makmal menggunakan petunjuk lain - bilangan salinan / ml. Kedua-dua penunjuk ini mudah untuk ditukar: 1 unit antarabangsa sama dengan 4 salinan RNA. Oleh itu, 2 × 10 * 6 IU / ml akan bermakna bahawa 8 × 10 * 6 salinan RNA virus dalam 1 ml, iaitu 8 juta salinan dalam 1 ml darah.

Genotyping adalah definisi salah satu dari enam genotip virus. Gambar klinikal, kadar perkembangan komplikasi hati dan prognosis untuk kehidupan masa depan pesakit bergantung kepada genotip agen penyebab. Genotip virus ini sangat penting sudah pada peringkat diagnosis, kerana gabungan ubat-ubatan dan tempoh kursus terapeutik yang diberikan kepada pesakit bergantung kepada penentuan yang betul.

Walau bagaimanapun, walaupun penyelidikan makmal yang seolah-olah "sempurna" ini mempunyai kelemahannya:

• Kajian ini mereplikasi bahan genetik semua patogen, bahkan tidak hidup, yang boleh memesongkan hasilnya. Oleh itu, untuk memantau keberkesanan dengan bantuan PCR, analisis semula dijalankan tidak lebih awal daripada 2 bulan selepas yang sebelumnya, supaya virus mati dapat "meninggalkan" organisme pesakit;
• sebahagian daripada genom virus, yang ditentukan dengan menggunakan sistem ujian, secara teori boleh hadir dalam virus atau mikroorganisma lain, jadi terdapat kemungkinan tindak balas positif palsu;
• virus bermutasi dengan cepat. Kadangkala kelajuan dan tahap mutasi virus begitu tinggi sehingga sistem ujian berhenti menangkap genom mereka. Akibatnya, hasil negatif palsu adalah mungkin.

Untuk mengatasi kelemahan ini, pengilang sistem ujian makmal untuk diagnostik PCR sentiasa menjalankan ujian mereka, termasuk tindak balas balas dan kepekaan terhadap genotip tertentu virus.

Bagaimana untuk mengambil ujian PCR untuk hepatitis C?

Agar kesimpulan peperiksaan PCR dapat dipercayai, adalah perlu untuk mematuhi peraturan-peraturan untuk mempersiapkannya dengan ketat:

• Kajian ini dilakukan pada perut kosong (glukosa, lemak, mineral yang masuk ke dalam darah dari makanan, boleh mempengaruhi kelajuan dan kualiti reaksi enzim);
• jurang antara makanan terakhir dan sampel darah untuk analisis hendaklah sekurang-kurangnya 8 jam;
• pada malam kajian itu dilarang mengambil alkohol dan mengkonsumsi makanan berlemak, tempoh penghapusan yang berlarutan;
• sehari sebelum pergi ke makmal harus mengelakkan tekanan fizikal dan emosi yang kuat;
• sehingga masa pensampelan darah tidak disyorkan untuk merokok.

Untuk mengelakkan penampilan kesimpulan palsu, pesakit yang didakwa mesti datang ke makmal sedikit lebih awal daripada darah yang akan diambil. Ia mengambil masa 15-20 minit untuk seseorang menangkap nafasnya, tenang. Adrenalin, yang terdapat di dalam darah selepas berjalan cepat, boleh menjejaskan keputusan peperiksaan.

Sekiranya pesakit yang dirujuk untuk analisis mengambil apa-apa ubat, dia perlu memaklumkan kepada doktor tentang perkara ini. Ada kemungkinan bahawa sebahagian daripada mereka akan ditolak untuk beberapa waktu (jika mungkin).

Hasil analisis PCR untuk hepatitis C

Mengekodkan hasil yang terlibat dalam makmal makmal yang melakukan analisis. Pengekodan adalah penentuan sisihan hasil yang diperoleh dari norma. Kadar penunjuk didirikan secara langsung oleh pengilang sistem ujian, yang digunakan oleh makmal untuk diagnostik. Oleh itu, tidak menghairankan bahawa di sesetengah makmal beban viral ditentukan dalam IU / ml, dan yang lain dalam salinan / ml.

Setelah menerima kesimpulan, adalah perlu untuk dapat menafsirkannya dengan betul. Rawatan hasil kajian harus dijalankan oleh doktor yang sedang menjalani rawatan dengan hepatitis C. Hanya setelah pemeriksaan yang objektif, instrumental dan laboratorium pasien, dokter dapat memperoleh jumlah data yang cukup untuk interpretasi yang tepat terhadap hasil PCR yang diperoleh.

Penilaian analisis kualitatif, sebagai peraturan, tidak menyebabkan kesulitan, walaupun pada pesakit. Hasilnya hanya ada satu: "dikesan" atau "tidak dikesan." Dalam kes ini, yang kedua adalah norma.

Petunjuk analisis kuantitatif lebih sukar untuk ditafsirkan. Ia menunjukkan tahap beban virus pada pesakit. Malah di kalangan pakar hepatologi, tidak ada konsensus mengenai cara merawat viremia yang dikesan. Kebanyakan doktor cenderung untuk percaya bahawa beban tinggi lebih daripada 8 × 10 * 5 IU / ml perlu dipertimbangkan. Beban lebih daripada 1 × 10 * 7 IU / ml dianggap sangat tinggi, manakala beban rendah kurang daripada 4 × 10 * 5 IU / ml.

Tahap beban virus menunjukkan virulensi (agresif) virus: semakin besar jumlahnya dalam darah, semakin cepat komplikasi hati dapat berkembang. Kepekatan virus yang tinggi dalam darah wanita hamil meningkatkan kemungkinan penembusannya melalui halangan hemato-plasenta kepada janin. Viremia juga memberi kesan kepada keberkesanan rawatan: dengan jumlah yang rendah, keberkesanan terapi lebih tinggi daripada yang tinggi.

Untuk yakin dengan ketepatan analisis PCR untuk hepatitis C, perlu diberikan keutamaan hanya kepada makmal yang terbukti dengan baik. Dasar harga dalam kes ini tidak seharusnya memainkan peranan utama.