Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

Hepatitis adalah penyakit serius yang mempunyai banyak sebab. Dasar perkembangannya adalah kerosakan langsung atau tidak langsung ke hati. Memandangkan kepentingannya untuk keseluruhan organisma, seseorang hanya boleh meneka betapa sukarnya patologi itu. Dalam artikel ini kita akan mengkaji secara terperinci ciri-ciri kursus dan diagnosis makmal hepatitis C.

Penyebab penyakit itu adalah agen virus yang merujuk kepada patogen yang mengandungi RNA. Ia mempunyai ciri tersendiri - keupayaan untuk bermutasi, iaitu mengubah strukturnya. Disebabkan ini, jangkitan itu melarikan diri daripada serangan sistem imun dan dalam kebanyakan kes menyebabkan keradangan kronik di hati.

Memandangkan kewujudan subtipe yang berlainan virus, pemilihan ubat-ubatan harus berdasarkan hasil genotip. Walaupun kajian lama terhadap penyakit dan ciri-ciri struktur HCV, belum ada kemungkinan untuk membangunkan vaksin tertentu untuk penyakit ini.

Kesukaran diagnosis awal terletak pada kursus asidtomatik hepatitis, akibatnya seseorang melawat doktor pada tahap sirosis. Untuk mengesan penyakit dalam masa, pemeriksaan perubatan yang kerap diperlukan. Hanya dengan ujian makmal darah adalah mungkin untuk mengesan HCV dan mencegah jangkitan orang di sekeliling anda. Hakikatnya ialah pembawa jangkitan itu boleh lama tidak meneka tentang patologi dan terus menghantar virus kepada orang yang sihat.

Cara Penghantaran

Dalam kebanyakan kes, virus merebak melalui darah, kerana ia mengandungi kepekatan tertinggi agen patogenik. Oleh itu, jangkitan disebarkan:

• dengan hemodialisis;
• dengan jarum yang dijangkiti;
• dalam proses pertempuran, apabila kulit cedera, dan kontak darah terjadi;
• dengan pemindahan darah (transfusi darah).

Kebarangkalian jangkitan semasa keintiman tidak signifikan, kerana terdapat sejumlah kecil patogen dalam air mani dan pembuangan vagina. Risiko jangkitan meningkat dengan ketara sebagai melanggar integriti membran mukus alat kelamin. Ini diperhatikan dengan seks agresif dan dubur.

Bagi mod penghantaran menegak, ia dijalankan dalam proses buruh. Dalam tempoh kehamilan janin, patogen tidak boleh menembusi melalui plasenta ke embrio. Dalam kelahiran semulajadi, agen patogenik dihantar ke anak apabila kulit cedera, ketika hubungan dengan darah ibu diperhatikan.

Selepas penembusan patogen ke dalam organisma yang sihat, sintesis antibodi bermula, yang merupakan perlindungan daripada jangkitan dan kepunyaan struktur imun. Mereka didapati dalam kajian awal seseorang yang menggunakan ELISA.

Untuk mengesahkan diagnosis, pesakit tertakluk kepada tindak balas rantai polimerase. Ini adalah analisis bahan genetik agen patogen dan penentuan beban virus.

Diagnosis makmal hepatitis C

Diagnosis makmal bermula dengan enzim immunoassay. Tugas utamanya adalah untuk mengesan antibodi yang dihasilkan terhadap patogen. Kecekapannya hampir 95%. Terima kasih kepada penyelidikan ini, adalah mungkin untuk mengenal pasti pembawa virus di peringkat praplinikal dan hantar untuk pemeriksaan lanjut.

Analisis kualitatif ELISA menunjukkan kehadiran atau ketiadaan imunoglobulin dalam darah pesakit. Hasilnya mungkin "positif" atau "negatif." Setelah menerima jawapan pertama, orang itu dihantar untuk pemeriksaan seterusnya - PCR. Harganya bergantung kepada kualiti reagen dan makmal. Kos tindak balas rantai polimer boleh mencapai 4 ribu rubel.

Ciri PCR

Menggunakan tindak balas rantai polimerase, walaupun sedikit bahan biologi membolehkan kita untuk menganggarkan beban virus dalam darah, iaitu, untuk mengira kepekatan patogen dalam satu mililiter cecair.

Dengan adanya PCR, diagnosis hepatitis telah menjadi lebih mudah. Analisis ini memungkinkan untuk mengenal pasti RNA HCV, untuk menubuhkan tahap proses berjangkit dan penyebaran virus pembawa.

Terdapat beberapa jenis diagnosis genetik:

1. Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C - mengesahkan kehadiran atau ketiadaan HCV dalam darah subjek:
2. kuantitatif, di mana anda boleh mengira kepekatan virus dan menubuhkan tahap penyakit. Hasilnya diberikan dalam IU / ml atau salinan / ml (bergantung kepada makmal);
3. genotip - diperlukan untuk menentukan genotip HCV. Ini diperlukan untuk pemilihan ubat yang tepat yang akan menjadi yang paling berkesan dalam kes ini. Analisis secara tidak langsung menunjukkan keterukan proses patologi di hati. Oleh itu, dalam genotip ketiga patogen, steatosis paling sering diperhatikan, asasnya ialah pengumpulan lemak dalam hepatosit (sel-selnya). Di samping itu, jenis virus menjejaskan hasil dan tempoh kursus terapeutik.

Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

Pertama sekali, bahan biologi diperiksa di makmal untuk kehadiran RNA HCV. Adalah penting untuk diingat bahawa analisis kualitatif terhadap hepatitis C mempunyai tahap kepekaan tertentu, dan oleh itu mungkin tidak selalu memberikan jawapan yang tepat. Dalam kes ini, disyorkan untuk menjalankan semula diagnostik makmal menggunakan reagen-reagen lain.

Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, sistem ujian dengan kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml harus digunakan.

Hasil diagnostik boleh sama ada "positif" atau "negatif". Jika patogen tidak terdapat dalam darah, kajian itu selesai. Jika ejen patogenik dikesan dalam sampel, maka beban virus dikira.

Satu tindak balas negatif palsu diperoleh apabila proses itu dilanggar, sebagai contoh, komponen aktif yang menyekat pembinaan salinan patogen yang memasuki medium. Oleh itu, tidak mungkin memaparkan gambar darah yang benar, sebab itu jangkitan seseorang tidak didiagnosis.

Hasil positif palsu boleh diperolehi jika tiub untuk pengumpulan bahan biologi, serta persekitaran untuk kajian itu tercemar. Di samping itu, respons analisa seperti itu mungkin dilakukan dengan jangkitan campuran, apabila hati terjejas oleh beberapa virus, contohnya, hepatitis C dan D.

Petunjuk untuk penyelidikan kualitatif

Doktor boleh menetapkan pesakit kajian kualitatif mengenai pengenalpastian RNA virus hepatitis C:

• setelah menerima respons immunoassay enzim yang positif atau meragukan;
• untuk pengesahan diagnosis;
• menentukan viral load;
• menetapkan tahap penyakit;
• diagnosis jangkitan bercampur. Hepatitis C kerap menjangkiti hati serentak dengan virus "D";
• penentuan taktik terapeutik dengan mempertimbangkan genotip agen penyebab;
• menilai dinamika perubahan semasa rawatan dengan ubat-ubatan antiviral.

Kelebihan reaksi polimerase termasuk:

1. sensitiviti tinggi teknik, yang membolehkan untuk mewujudkan fakta jangkitan di peringkat praslinik;
2. pengenalpastian bahan genetik patogen, dan bukannya antibodi;
3. kemungkinan menubuhkan subjenis daripada agen patogenik;
4. kadar diagnostik yang tinggi, kerana tiada pembenihan bahan pada medium nutrien diperlukan, dan ia mencukupi untuk menggunakan sistem ujian tertentu. Seorang mendapat keputusan selepas 5 jam;
5. serba boleh. Analisis ini membolehkan untuk mengenal pasti sebarang bahan genetik (RNA, DNA). Terima kasih kepada ini, doktor boleh mengesahkan hepatitis C dan jenis penyakit lain (B);
6. keupayaan untuk mengesan jangkitan laten.

Penyelidikan kuantitatif

Dalam kajian darah menggunakan tindak balas rantai polimer boleh menghitung jumlah patogen dalam jumlah tetap bahan biologi. Penunjuk ditunjukkan dalam IU / ml. Melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan tahap penularan pesakit, menentukan tahap proses menular, dan juga menilai keberkesanan terapi ubat.

Berdasarkan PCR, pakar memutuskan bahawa dos ubat dapat menghalang pembiakan patogen. Di samping itu, tempoh rawatan dan prognosis antiviral untuk jangka hayat ditentukan. Adalah penting untuk diingat bahawa sistem ujian mempunyai sensitiviti yang tinggi, oleh itu, kaedah ini memungkinkan untuk mengesahkan jangkitan seseorang di peringkat praslinik.

Genotyping

Memandangkan keupayaan patogen untuk bermutasi, genotipnya diperlukan untuk menentukan taktik rawatan dan pilihan ubat antiviral. Sebagai contoh, rawatan HCV 1 berlangsung selama 48 minggu, dengan trend positif hanya dapat dilihat dalam 60% kes. Genotip 2 dan 3 mempunyai prognosis yang lebih baik. Ubat antiviral ditetapkan selama 8 bulan, dan keberkesanannya mencapai 85%.

Menurut statistik, dalam kebanyakan kes, HCV 1, 2 dan 3 didaftarkan di Persekutuan Rusia.

Apabila menafsirkan ujian makmal, jawapan ini boleh ditunjukkan - "tidak ditaip". Ini bermakna bahawa virus beredar dalam sistem peredaran pesakit dan tidak boleh diiktiraf oleh sistem ujian. Hasil analisis dalam hal ini menunjukkan bahwa patogen tidak tipikal untuk kawasan geografis tertentu.

Bagaimana untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai?

Untuk kajian kualitatif PCR untuk mengesan RNA agen penyebab hepatitis C menunjukkan keputusan yang betul, adalah perlu untuk mematuhi keperluan untuk menyediakan diagnostik makmal:

1. pensampelan darah dijalankan pada perut kosong, dan jurang "lapar" tidak boleh lebih pendek daripada 8 jam;
2. dua hari sebelum kajian, disyorkan untuk berhenti meminum minuman beralkohol dan meninggalkan masakan pedas, berlemak dan salai;
3. membatalkan pengenalan dadah yang mengurangkan pembekuan darah, misalnya, heparin. Sekiranya ubat-ubatan ini ditetapkan untuk sebab-sebab kesihatan, anda mesti memberitahu doktor. Di samping itu, pakar perlu menyedari kemasukan ubat lain yang boleh menjejaskan hasil penyelidikan makmal;
4. Pada malam pengumpulan bahan biologi, prosedur physiotherapeutic tidak boleh dijalankan dan harus tertakluk kepada penuaan fizikal yang teruk.

Hasil analisis dapat dipengaruhi bukan hanya oleh orang yang menyumbangkan darah, tetapi juga oleh faktor-faktor lain, yaitu:

• pensampelan darah berkualiti rendah;
• tidak mematuhi saranan pengangkutan bahan biologi;
• latihan pekerja makmal yang tidak mencukupi;
• tidak mematuhi teknik penyelidikan;
• pengenalan antikoagulan (heparin) pada malam pensampelan darah. Kumpulan ubat ini mengurangkan pembekuan, sekali gus memperlahankan kerja reagen.

Di makmal yang berbeza, tindak balas diagnostik mungkin berbeza sedikit, tetapi kesilapan ini tidak menjejaskan hasil akhir kajian.

Perhatian khusus diberikan kepada jenis sistem ujian yang digunakan di makmal. Selalunya keutamaan diberikan kepada reagen dengan sensitiviti yang tinggi. Ini penting bagi pesakit yang mempunyai viral load yang rendah kerana sukar untuk dikesan.

Berapa kerapkah ujian makmal dilakukan?

Reaksi rantai polimer primer dilakukan pada orang yang telah dikesan oleh immunoassay untuk antibodi kepada patogen hepatitis. Dalam kes ini, ia ditugaskan untuk mengesahkan fakta jangkitan seseorang dan menubuhkan tahap penyakit. Di samping itu, analisis ini membolehkan untuk menentukan subtipe virus, yang sangat penting untuk pilihan ubat-ubatan.

Tempoh berikutnya untuk ujian makmal wajib adalah 3 bulan dari permulaan terapi antiviral. Diagnostik memungkinkan untuk menilai keberkesanan ubat, laraskan dos atau menggantikannya.

Sebagai tambahan kepada ujian asas, PCR boleh dilakukan pada 4 dan 24 minggu dari permulaan rawatan. Prognosis positif penyakit itu disahkan oleh penurunan dalam viral load selepas tiga bulan terapi. Contohnya, ia harus berkurang dari 1 juta IU / ml kepada beberapa ratus ribu.

Jika kepekatan agen patogenik dalam darah kekal pada tahap yang sama atau bertambah sedikit, ini menandakan keberkesanan ejen antiviral dan memerlukan penggantiannya. Menggunakan PCR pada akhir rawatan, adalah mungkin untuk mengesahkan pemulihan pesakit.

Untuk menerangkan dengan betul hasil diagnostik makmal, perundingan pakar hepatologi atau pakar penyakit berjangkit diperlukan. Memandangkan frekuensi tinggi tindak balas palsu dalam ELISA, analisis ini digunakan secara eksklusif untuk penyaringan utama. Untuk pemeriksaan yang lebih menyeluruh terhadap pesakit yang menggunakan reaksi rantai polimerase.

Pro analisis PCR untuk virus hepatitis C

Hepatitis C adalah penyakit hati yang serius bagi mana-mana orang. Patologi itu disebabkan oleh flavivirus HCV, dalam struktur yang mana molekul RNA hadir, yang menanggung kod genetik umum virus.

Patologi boleh menjadi bentuk yang berbeza, semuanya secara langsung bergantung kepada keadaan umum orang dan ciri-ciri setiap organisma individu.

Struktur ini memungkinkan untuk menganalisis PCR untuk kehadirannya dalam tubuh virus dari kategori hepatitis C.

Ia membolehkan anda tepat pada masanya mengenal pasti virus yang berbahaya bagi manusia, menjalani rawatan dadah dan memulihkan kesihatan, melindungi tubuh daripada pemusnahan hati.

Virus HCV dapat mewujudkan dirinya sendiri, baik dalam bentuk akut yang berbahaya, dan dalam kronik. Jika seseorang pada satu masa atau yang lain telah mengesan virus ini, ia mesti diberikan kepada analisis PCR.

Mengapa analisis PCR dilakukan?

Berdasarkan hasil analisis, doktor akan dapat membuat rejimen rawatan.

Analisis perubatan makmal PCR untuk hepatitis C adalah kajian mengenai bahan biologi yang diambil untuk menentukan flavavirus. Kajian ini adalah tindak balas rantaian polimerase.

Ia menunjukkan jumlah nilai kuantitatif luka viral, sifat kualitatifnya, dan juga mungkin untuk menentukan genotip virus yang mengandungi RNA.

Ia penting! Ia berdasarkan analisis ini bahawa doktor menentukan kaedah, jenis terapi dan tempohnya. Juga, melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan faktor epidemiologi keseluruhan, iaitu, tahap risiko penghantaran penyakit kepada pembawa lain.

Analisis dalam perubatan moden juga dipanggil analisis RNA. Alasannya adalah bahawa hepatitis C flavavirus yang terdiri daripada zarah RNA, saiznya kira-kira 30-60 nm. Salah satu ciri ciri virus ini adalah kecenderungan mutasi tertentu.

Setiap subspesies atau genotip hadir mempunyai pelbagai rintangan. Keadaan ini menjadi asas bagi pelbagai kaedah penyelidikan dan rawatan penyakit, serta prognosis lanjut dengan terapi yang dijalankan dengan baik.

Bagaimana pula

Analisis dilakukan dengan ketat pada perut kosong, iaitu, darah vena diberikan sebelum sarapan pagi. Kaedah ujian dijalankan melalui PCR Masa Nyata atau sangat sensitif dengan diagnostik piawai moden, yang dijalankan secara real time.

Batasan pengesanan yang lebih rendah dalam kes ini ialah 15 IU / ml. Analisis ini dijalankan dengan ketat menggunakan sistem automatik tertutup. Hepatitis C boleh ditentukan menggunakan ujian seperti COBAS AMPLICOR dengan tahap sensitiviti keseluruhan 50-100 IU / ml.

Ia penting! Semua jenis penyelidikan makmal moden yang serupa dijalankan dengan mengambil kira tahap sensitiviti tertentu.

Kami bercakap tentang keupayaan reagen yang digunakan untuk mengesan tahap minimum keupayaan reagen untuk menentukan virus dalam bahan biologi yang sedang diteliti. Sekiranya tiada penyakit di dalam badan, hasil kajian akan kelihatan seperti "tidak dijumpai".

Gambar menunjukkan litar analisis PCR:

Jenis analisis PCR dan hasilnya

Sekiranya anda mempunyai penyakit yang paling kecil dan kesakitan dalam bidang cookies, anda harus segera berjumpa dengan doktor yang akan menjalankan kajian menyeluruh. Analisis PCR untuk hepatitis C berdasarkan tiga perkara utama:

1. Analisis kuantitatif.
2. Analisis kualitatif.
3. Genotyping

Ujian yang dijalankan memberi peluang untuk menentukan dan mengenal pasti sifat sebenar viremia dan gejala pelan genetik yang berbeza dari kehadiran patogen. Sebaliknya secara langsung dengan kepekaan, dari sistem diagnostik yang dijalankan, penyelidikan perubatan dapat dilakukan sekali, serta beberapa pengesahan.

Ini perlu dilakukan untuk menjelaskan keputusan yang diperoleh sebelum ini, dan digunakan dalam kes ini oleh reagen yang lebih sensitif.

PCR berkualiti tinggi

Analisis kualitatif untuk PCR adalah nama lain untuk kajian seperti tindak balas rantai polimerase. Dengan kepekaan standard ujian, yang membolehkan untuk menentukan kehadiran mikrob virus, penunjuk akan berada dalam lingkungan 10-500 IU / ml.

Dengan analisis negatif terhadap penyakit ini, analisis akan menunjukkan bahawa jumlah kepekatan dalam darah pesakit akan menjadi urutan magnitud yang lebih rendah daripada ambang kerentanan umum untuk sistem diagnostik.

Jika tindak balas "tidak dikesan" diperoleh semasa kualiti PCR, untuk rawatan berikutnya, anda perlu mengetahui jumlah sensitiviti ambang reagen itu. Bagi tindak balas positif, semasa analisis PCR, ia boleh didapati pada hari ke-4 selepas jangkitan. Fraksi protein standard untuk flavavirus yang ditetapkan mungkin muncul lebih lama kemudian.

Skim umum analisis PCR boleh digambarkan seperti berikut:

PCR kuantitatif

PCR kuantitatif adalah penunjuk khas mengenai viral load yang dihasilkan, mencerminkan tahap keseluruhan RNA virus dalam tubuh manusia. Penunjuk ini menunjukkan jumlah enzim RNA virus yang terdapat setiap sentimeter padu yang diambil dari urat darah.

Hasil kajian ini dalam sistem penyelidikan perubatan dinyatakan dalam unit satu mililiter. Mengenai sijil yang dikeluarkan di tangan, penunjuk ini mungkin kelihatan seperti 1.7 juta atau 1.700.000 IU / ml.

Analisis PCR kuantitatif diberikan kepada pesakit sebelum menjalankan terapi antivirus. Kali kedua diadakan pada minggu ke-12 rawatan, yang membolehkan anda mengevaluasi hasil terapi dengan hepatitis C. dengan betul, dengan analisis lain, memungkinkan untuk menentukan parameter penting seperti:

1. Tahap infektivitas, iaitu, tahap risiko penghantaran mikrob daripada orang yang dijangkiti kepada orang yang sihat ditentukan. Semakin tinggi kepekatan RNA flavavirus, semakin tinggi kebarangkalian jangkitan orang lain, yang penting dalam hubungan seksual.
2. Tahap keberkesanan keseluruhan dan kaedah rawatan yang dipilih.
3. Ini adalah peluang yang ideal untuk menentukan tempoh dan prognosis terapi antiviral. Sebagai peraturan, semakin tinggi beban, semakin lama rawatan akan berlangsung.

Perlu diketahui bahawa PCR kuantitatif bergantung kepada jenis ujian makmal tertentu dan ambang kepekaan. Had paling rendah dari standard yang ditetapkan adalah indikator yang tidak mencapai 600.000 IU / ml.

Rata-rata adalah dalam lingkungan 600,000 hingga 700,000 IU / ml. Sekiranya keputusan diperolehi melebihi 800.000 IU / ml, doktor segera menentukan tahap kepekatan bahan seperti RNA dengan virus yang terdapat di komposisi.

Ia penting! Hubungan langsung antara tahap RNA HCV dan keparahan penyakit menunjukkan bahawa virus ini hadir dalam komposisi darah keseluruhan, dan juga nota kerumitan patologi. Pesakit mungkin mempunyai beban virus yang cukup tinggi. Di samping itu, hubungan ini menunjukkan bahawa terdapat kerosakan yang agak serius terhadap sel-sel.

Genotyping

Oleh kerana aktiviti mutasi HCV yang agak tinggi, dalam menjalankan ujian yang dijalankan, adalah mungkin untuk menentukan bagaimana jenis virus hadir dalam darah seseorang yang sakit. Dalam perubatan moden, 11 genotip virus seperti hepatitis C diketahui. Ia termasuk sejumlah besar subspesies atau subtipe yang berbeza.

Jenis-jenis 1,2 dan 3 diketahui dan lazim di Rusia. Umumnya, genotip adalah elemen penting dalam analisis yang dilakukan. Dengan itu, doktor memahami tahap rintangan atau rintangan patologi kepada ubat-ubatan yang dipilih.

Hampir selalu, berdasarkan analisis ini, rawatan masa depan dibina. Ini penting kerana terdapat peraturan rawatan seperti:

Analisis kualitatif untuk hepatitis C

8 Mac, 2017, 12:29 Artikel ahli: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10,547

Analisis kualitatif tindak balas rantai polimerase - PCR untuk hepatitis C menentukan kehadiran atau ketiadaan HCV dalam badan. Dalam keadaan makmal, struktur RNA diselidiki, yang akan merangkumi virus. Dalam kes pengesanan virus C, perlu menjalani rawatan, kerana keadaan hati yang terabaikan akan menyebabkan akibat yang teruk. PCR berkualiti tinggi dilakukan selepas pemulihan untuk mengesahkan ketiadaan antibodi. Dilantik dan untuk pemeriksaan rutin. Dengan kepekatan rendah agen penyebab dalam darah, PCR (kualitatif) tidak dapat mengesan apa-apa, kerana sistem diagnostik mempunyai ambang kepekaan sendiri. Dalam kes peringkat awal penyakit atau bentuk ringan, PCR dilakukan oleh ultradiagnostics pada peralatan ultra-sensitif.

Apakah virus RNA?

Istilah RNA virus hepatitis C (atau RNA virus hepatitis C) adalah penyakit hati itu sendiri. Virus C mengikat ke sel tubuh yang sihat dengan menembusi ke dalam. Lama kelamaan, tersebar di seluruh badan, hanya perlu masuk ke dalam darah. Akibatnya, patogen itu menembusi hati, bersatu dengan sel-selnya dan bekerja keras. Sel-sel hepatik (hepatosit) berfungsi di bawah pengaruhnya, menjalani perubahan, dan dari ini mereka mati. Semakin lama virus C berada di hati, semakin banyak jumlah sel mati. Lama kelamaan, penyakit berbahaya berkembang, membawa kepada kemerosotan ganas dan kematian.

Jangkitan hati dengan jenis virus ini mungkin tidak nyata secara luaran. Selama bertahun-tahun atau beberapa dekad, orang yang dijangkiti terasa sihat, dan hanya pemeriksaan rawak yang paling sering mendedahkan patologi. Apabila menderma darah untuk hepatitis, sebahagian daripada rantaian RNA (ribonucleic acid), yang merupakan sebahagian daripada gen manusia (DNA), diperiksa. Hasil ujian makmal tidak boleh digunakan untuk perawatan diri, karena ini hanya penunjuk. Gambaran yang tepat dan diagnosis lanjut adalah lebih baik ditentukan oleh doktor.

Apabila selesai: petunjuk untuk penyelidikan

Dalam pengesahan HCV, analisis PCR dilakukan (tindak balas rantai polimerase). Kajian PCR membantu mencari agen penyebab dalam struktur RNA dan menetapkan terapi yang berkesan. Dilantik dalam kes berikut:

• pengesanan tanda-tanda keradangan hati;
• kajian skrining untuk pencegahan;
• pemeriksaan orang yang dihubungi;
• diagnosis hepatitis asal campuran (penentuan patogen utama);
• menentukan tahap aktiviti pembiakan virus dalam bentuk kronik;
• sirosis hati;
• untuk menentukan keberkesanan rawatan yang ditetapkan.

Penyelidikan PCR menetapkan doktor untuk menentukan keberkesanan rawatan rawatan hepatitis.

Terdapat analisis kualitatif serta analisis kuantitatif PCR. PCR kuantitatif menunjukkan peratusan RNA dengan pembawa virus dalam darah, dan kualitatif menunjukkan kehadiran atau ketiadaan virus. Penunjuk positif kualiti (kehadiran Hepatitis C RNA) juga memerlukan penyelidikan kuantitatif. Tahap penumpuan yang tinggi dari agen penyebab hepatitis C dikaitkan dengan risiko penularannya, iaitu, jangkitan orang lain. Nombor yang rendah lebih baik dirawat. Jumlah virus RNA dalam darah tidak berkaitan dengan intensiti penyakit ini. Analisis PCR juga dilakukan dalam kes terapi interferon untuk menetapkan tempoh dan kerumitan kursus rawatan.

Ciri-ciri analisis PCR berkualiti tinggi untuk hepatitis C

Analisis kualitatif ditugaskan dengan penunjuk tindak balas rantai polimerase bagi semua pesakit yang mempunyai antibodi untuk hepatitis C dalam darah mereka. Mereka yang telah sakit dan didapatkan mesti mengambil ujian semula. Adalah disyorkan untuk mengambil analisis untuk hepatitis B, maka, jika kesimpulan positif, dan untuk hepatitis D. Juga, tindak balas kualitatif yang dianalisis harus dilakukan bersamaan dengan ujian darah yang lain. Analisis akan menunjukkan gambaran lengkap penyebaran virus.

Dari hasil ujian, hanya ujian positif untuk hepatitis C akan kelihatan atau negatif, iaitu kehadiran atau ketiadaan virus. Jika output "dikesan", maka virus itu dan terus aktif. Penetapan "tidak dikesan" menunjukkan ketiadaan virus atau jumlahnya yang kecil. Dengan penunjuk ini, perlu diingat bahawa sensitiviti analisis sistem diagnostik adalah berbeza dan bahawa hepatitis C RNA masih boleh di dalam darah, tetapi tidak ditunjukkan dalam analisis.

Kaedah PCR yang sangat sensitif mendedahkan ultra hepatitis C walaupun dalam jumlah yang sedikit. Kajian hibridensi fluoresen digunakan, yang banyak kali lebih tinggi daripada sistem PCR standard. Kaedah ini digunakan dalam beberapa kes:

• disyaki bentuk tersembunyi hepatitis C;
• Diagnostik PCR tidak mengesahkan patogen, tetapi terdapat antibodi;
• dalam kes pemulihan;
• untuk mengesan jangkitan awal.

Kembali ke jadual kandungan

Analisis penyahkodan

Penyahkodan PCR HCV mempengaruhi keputusan muktamad ketika membuat diagnosis, khususnya dengan metode ultrametod. Kelemahan utama kajian ini adalah mematuhi syarat steril untuk sampel dan bahan. Penyimpangan sedikit kadang-kadang menunjukkan kesimpulan analitis yang tidak tepat, merumitkan diagnosis dan rawatan berikutnya. Analisis PCR untuk menentukan RNA hepatitis tidak senantiasa menunjukkan gambar penyakit, kadang kala ketidakakurasian dibenarkan, dan di kedua-dua arah.

Mendiagnosis virus hepatitis, disyorkan untuk menggunakan peperiksaan yang komprehensif.

Norma petunjuk

Ketiadaan antibodi JgM kepada hepatitis C virus dalam keputusan kajian dianggap sebagai norma dalam analisis reaksi rantai polimerase. Pada masa yang sama, penemuan analisis serologi menunjukkan kehadiran antibodi terhadap virus C dan ini juga berada dalam jarak normal. Takrif kualitatif tidak menunjukkan keamatan penyakit, ia hanya mendedahkan agen penyebab hepatitis C dalam RNA. Analisis ini diulangi selepas rawatan untuk mengesahkan pemulihan sebenar.

Penyimpangan

Jika antibodi JgM kepada RNA HCV hadir, ini menunjukkan jangkitan yang membina. Penyakit ini pada masa yang sama meneruskan akut atau kronik, diwujudkan dalam pelbagai peringkat. Jika penurunan jumlah antibodi direkodkan, analisis akan menunjukkan bahawa hasil rawatan dicapai semasa pemulihan. Terdapat kes-kes penemuan positif palsu dalam diagnosis. Mereka ditemui pada wanita semasa kehamilan dan pada orang dengan penyakit berjangkit lain.

Analisis PCR untuk Hepatitis C

Untuk diagnosis "hepatitis C virus kronik (CVHS)" memerlukan pemeriksaan komprehensif terhadap orang itu, termasuk kajian klinikal, makmal dan instrumental. Penting dari sudut pandangan diagnosis untuk diagnosis yang betul adalah kaedah PCR - tindak balas rantai polimerase.

Apakah analisis ini menunjukkan dan mengapa ia diperlukan?

Kaedah makmal ini mengesan RNA virus hepatitis C dalam darah manusia. Bersama dengan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) untuk antibodi kepada virus, PCR digunakan untuk membuat diagnosis CVHC dan genotip patogennya. Penyelidikan ini merupakan salah satu kaedah terbaru diagnostik makmal. Kebolehpercayaannya pada CVHS melebihi 97%, yang dianggap penunjuk yang sangat baik untuk penyelidikan.

Terdapat tiga ujian darah PCR untuk CVHS: genotip kualitatif, kuantitatif dan virus. Kajian pertama (analisis kualitatif) virus mengesannya dalam darah, dan oleh itu hanya digunakan untuk diagnosis.

Kajian kedua (kuantitatif) menentukan tahap viral load pada tubuh, oleh itu, digunakan untuk memantau keberkesanan terapi.

PCR ketiga (genotip) menjelaskan diagnosis, mewujudkan genotip virus, yang sangat penting untuk pelantikan rawatan antiviral yang betul.

Inti dari teknik tindak balas rantai polimerase ialah penggunaan enzim yang membiak bahan genetik patogen dalam biomaterial. Dalam proses replikasi tersebut, tiub dengan darah dipanaskan beberapa kali dan disejukkan kepada suhu yang diperlukan untuk mempercepatkan reaksi enzim. Hasil daripada manipulasi ini, jumlah genom virus meningkat banyak kali, membolehkan ia dikesan walaupun dengan jumlah minimum.

Diagnostik PCR mempunyai banyak kelebihan berbanding ujian makmal yang lain:

• kepekaan tinggi - 97-98%;
• menjamin spesifik analitik (mendedahkan tepat patogen yang anda mahu cari, dan bukannya berkaitan dengannya);
• kelajuan menjalankan (ia tidak mengambil masa lebih daripada 2 hari untuk mendapatkan kesimpulan).

Tiga jenis ujian PCR

Analisis PCR berkualiti tinggi diberikan kepada semua pesakit yang mana analisis ELISA mengesan antibodi kepada virus HVGS. Selepas menjalankan PCR berkualiti tinggi, dua pilihan tindak balas boleh diperolehi: "RNA dikesan" atau "RNA tidak dikesan." Untuk mengesan jumlah minimum virus dalam darah, sistem ujian dengan kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml diperlukan. Sekiranya kepekatan virus dalam darah pesakit kurang daripada diagnostik boleh menentukan, hasil kajian mungkin negatif palsu. Untuk mengelakkan ralat diagnostik sedemikian, makmal yang menjalankan diagnostik PCR perlu disediakan dengan sistem ujian yang sensitif. Di makmal "Invitro", sebagai contoh, ujian dengan kepekaan 15 IU / ml digunakan. Pekerja-pekerja makmal wajib memberikan maklumat mengenai kepekaan ujian kepada pesakit dan doktor atas permintaan pertama mereka.

Analisis kuantitatif PCR menentukan tahap viremia, iaitu kepekatan patogen dalam darah, beban virus. Hasil kajian ini, berbanding dengan PCR berkualiti tinggi, dinyatakan dalam angka, misalnya, 2 × 10 * 6 IU / ml, yang berarti 2 juta unit internasional dalam 1 ml darah. Beberapa makmal menggunakan petunjuk lain - bilangan salinan / ml. Kedua-dua penunjuk ini mudah untuk ditukar: 1 unit antarabangsa sama dengan 4 salinan RNA. Oleh itu, 2 × 10 * 6 IU / ml akan bermakna bahawa 8 × 10 * 6 salinan RNA virus dalam 1 ml, iaitu 8 juta salinan dalam 1 ml darah.

Genotyping adalah definisi salah satu dari enam genotip virus. Gambar klinikal, kadar perkembangan komplikasi hati dan prognosis untuk kehidupan masa depan pesakit bergantung kepada genotip agen penyebab. Genotip virus ini sangat penting sudah pada peringkat diagnosis, kerana gabungan ubat-ubatan dan tempoh kursus terapeutik yang diberikan kepada pesakit bergantung kepada penentuan yang betul.

Walau bagaimanapun, walaupun penyelidikan makmal yang seolah-olah "sempurna" ini mempunyai kelemahannya:

• Kajian ini mereplikasi bahan genetik semua patogen, bahkan tidak hidup, yang boleh memesongkan hasilnya. Oleh itu, untuk memantau keberkesanan dengan bantuan PCR, analisis semula dijalankan tidak lebih awal daripada 2 bulan selepas yang sebelumnya, supaya virus mati dapat "meninggalkan" organisme pesakit;
• sebahagian daripada genom virus, yang ditentukan dengan menggunakan sistem ujian, secara teori boleh hadir dalam virus atau mikroorganisma lain, jadi terdapat kemungkinan tindak balas positif palsu;
• virus bermutasi dengan cepat. Kadangkala kelajuan dan tahap mutasi virus begitu tinggi sehingga sistem ujian berhenti menangkap genom mereka. Akibatnya, hasil negatif palsu adalah mungkin.

Untuk mengatasi kelemahan ini, pengilang sistem ujian makmal untuk diagnostik PCR sentiasa menjalankan ujian mereka, termasuk tindak balas balas dan kepekaan terhadap genotip tertentu virus.

Bagaimana untuk mengambil ujian PCR untuk hepatitis C?

Agar kesimpulan peperiksaan PCR dapat dipercayai, adalah perlu untuk mematuhi peraturan-peraturan untuk mempersiapkannya dengan ketat:

• Kajian ini dilakukan pada perut kosong (glukosa, lemak, mineral yang masuk ke dalam darah dari makanan, boleh mempengaruhi kelajuan dan kualiti reaksi enzim);
• jurang antara makanan terakhir dan sampel darah untuk analisis hendaklah sekurang-kurangnya 8 jam;
• pada malam kajian itu dilarang mengambil alkohol dan mengkonsumsi makanan berlemak, tempoh penghapusan yang berlarutan;
• sehari sebelum pergi ke makmal harus mengelakkan tekanan fizikal dan emosi yang kuat;
• sehingga masa pensampelan darah tidak disyorkan untuk merokok.

Untuk mengelakkan penampilan kesimpulan palsu, pesakit yang didakwa mesti datang ke makmal sedikit lebih awal daripada darah yang akan diambil. Ia mengambil masa 15-20 minit untuk seseorang menangkap nafasnya, tenang. Adrenalin, yang terdapat di dalam darah selepas berjalan cepat, boleh menjejaskan keputusan peperiksaan.

Sekiranya pesakit yang dirujuk untuk analisis mengambil apa-apa ubat, dia perlu memaklumkan kepada doktor tentang perkara ini. Ada kemungkinan bahawa sebahagian daripada mereka akan ditolak untuk beberapa waktu (jika mungkin).

Hasil analisis PCR untuk hepatitis C

Mengekodkan hasil yang terlibat dalam makmal makmal yang melakukan analisis. Pengekodan adalah penentuan sisihan hasil yang diperoleh dari norma. Kadar penunjuk didirikan secara langsung oleh pengilang sistem ujian, yang digunakan oleh makmal untuk diagnostik. Oleh itu, tidak menghairankan bahawa di sesetengah makmal beban viral ditentukan dalam IU / ml, dan yang lain dalam salinan / ml.

Setelah menerima kesimpulan, adalah perlu untuk dapat menafsirkannya dengan betul. Rawatan hasil kajian harus dijalankan oleh doktor yang sedang menjalani rawatan dengan hepatitis C. Hanya setelah pemeriksaan yang objektif, instrumental dan laboratorium pasien, dokter dapat memperoleh jumlah data yang cukup untuk interpretasi yang tepat terhadap hasil PCR yang diperoleh.

Penilaian analisis kualitatif, sebagai peraturan, tidak menyebabkan kesulitan, walaupun pada pesakit. Hasilnya hanya ada satu: "dikesan" atau "tidak dikesan." Dalam kes ini, yang kedua adalah norma.

Petunjuk analisis kuantitatif lebih sukar untuk ditafsirkan. Ia menunjukkan tahap beban virus pada pesakit. Malah di kalangan pakar hepatologi, tidak ada konsensus mengenai cara merawat viremia yang dikesan. Kebanyakan doktor cenderung untuk percaya bahawa beban tinggi lebih daripada 8 × 10 * 5 IU / ml perlu dipertimbangkan. Beban lebih daripada 1 × 10 * 7 IU / ml dianggap sangat tinggi, manakala beban rendah kurang daripada 4 × 10 * 5 IU / ml.

Tahap beban virus menunjukkan virulensi (agresif) virus: semakin besar jumlahnya dalam darah, semakin cepat komplikasi hati dapat berkembang. Kepekatan virus yang tinggi dalam darah wanita hamil meningkatkan kemungkinan penembusannya melalui halangan hemato-plasenta kepada janin. Viremia juga memberi kesan kepada keberkesanan rawatan: dengan jumlah yang rendah, keberkesanan terapi lebih tinggi daripada yang tinggi.

Untuk yakin dengan ketepatan analisis PCR untuk hepatitis C, perlu diberikan keutamaan hanya kepada makmal yang terbukti dengan baik. Dasar harga dalam kes ini tidak seharusnya memainkan peranan utama.

Penggunaan diagnostik PCR

Reaksi rantai polimerase (PCR) dalam biologi molekul adalah kaedah eksperimen untuk mengesan virus. Ia membolehkan anda meningkatkan ketumpatan kepekatan sesetengah asid nukleik tertentu (DNA) dalam sampel bahan biologi, yang memungkinkan untuk menentukan (mengenali) dan menghitungnya.

Analisis dilakukan seperti berikut. Bahan genetik (sampel darah), yang boleh merangkumi gen yang dikehendaki, dimasukkan ke dalam tiub. Terdapat juga primer - segmen sintetik kimia yang panjang panjang gen yang dikehendaki.

Polimerase DNA atau RNA juga ditambah ke dalam vesel, ia dapat menyusun rantai asid nukleik yang sama sekali sama dengan yang asal. Komposisi yang dihasilkan disuntik dan satu set empat nukleotida bebas - bahan bangunan khusus untuk RNA atau DNA, salah satunya mengandungi zarah fosforus radioaktif.

Campuran yang dihasilkan dipanaskan hingga 95-96 ° C, itulah sebabnya dua heliks DNA, yang biasanya saling berkaitan, ditenun. Kemudian ubat disejukkan, pada masa itu primers itu sendiri melekat pada rantau genom virus yang dikehendaki, menghalang RNA (atau DNA) daripada membentuk kembali heliks ganda.

Dalam proses penyejukan, polimerase mencari rantaian nukleotida bebas. Untuk fungsi enzim ini diperlukan satu rangkaian nukleotida. Kerana polimerase tergelincir di sepanjang rantai DNA (seperti cincin pada tali), ia tidak dapat berfungsi pada helix berganda.

Selepas ini, kitaran pemanasan berulang dilakukan, kerana rangkaian nukleotida dipisahkan. Di setiap kitaran PCR ini, jumlah dalam sampel gen dikehendaki hepatitis meningkat dengan pesat, dan selebihnya bahan genetik dihasilkan (bertumbuh) secara linear.

Selepas pembersihan penyelesaian daripada residu nukleotida dan pemisahan oleh elektroforesis rangkaian rantai DNA oleh parameter berat molekul, seseorang dapat menentukan sama ada terdapat gen yang dikehendaki dalam sampel yang di bawah kajian atau tidak.

Faedah PCR

Ujian makmal menggunakan PCR membolehkan lebih banyak maklumat diperoleh daripada kehadiran virus RNA. Dengan menentukan parameter tahap radiasi radioaktif, adalah mungkin untuk mengenal pasti berapa banyak bahan genetik yang asalnya terkandung dalam sampel yang di bawah kajian. Dalam kes hepatitis, tentukan penunjuk tahap beban virus.

Satu lagi kelebihan kaedah ini adalah tahap kepekaan sensitiviti CR yang sangat tinggi. Ia lebih tinggi daripada kaedah klasik untuk mengesan virus. Idealnya, untuk mengenal pasti gen yang dikehendaki, untuk PCR, hanya satu virus dalam sampel yang mencukupi.

Di samping itu, PCR adalah benar-benar khusus. Primernya direka sedemikian rupa sehingga mereka sepenuhnya sesuai dengan kawasan unik gen-gen yang dikehendaki yang tidak ada urutan lain. Seperti cap jari adalah unik, setiap gen mempunyai urutan unik nukleotida.

Analisis kualitatif PCR

Analisis kualitatif hanya mendedahkan kehadiran virus dalam darah. Ujian ini perlu dilakukan untuk semua pesakit yang mana antibodi untuk hepatitis C didapati dalam darah. Ia boleh mengakibatkan hanya satu daripada dua nilai: "dikesan" atau "tidak dikesan." Dalam orang yang sihat, norma (nilai rujukan) mestilah "tidak dikesan".

Terdapat penafsiran khas mengenai hasil penyelidikan kualitatif tersebut:

• Hasilnya "dikesan." Ini bermakna bahawa serpihan RNA yang spesifik untuk virus hepatitis C didapati dalam sampel dianalisis bahan biologi yang diambil. Akibatnya, ada fakta bahawa pesakit itu dijangkiti virus hepatitis C. dan pada masa ini ia menjangkiti sel hati baru di dalam badan.
• Hasilnya "tidak dikesan." Keputusan sedemikian menunjukkan bahawa dalam sampel dianalisis bahan biologi yang diperolehi dalam makmal ini, tidak ada serpihan RNA yang didapati khusus untuk virus hepatitis C.

Dalam fasa akut virus RNA hepatitis C, kajian kualitatif oleh kaedah PCR boleh dikesan selepas 1-2 minggu selepas jangkitan badan, iaitu sebelum penampilan antibodi ke hepatitis itu sendiri.

Keputusan ujian yang tidak dapat dipercayai dari kajian ini boleh didapati dengan:

• biomaterial tercemar;
• kehadiran heparin dalam darah pesakit;
• kehadiran dalam sampel bahan kimia atau protein (perencat) yang memberi kesan kepada pelbagai komponen PCR.

Untuk melakukan analisis kualitatif PCR, tidak ada penyediaan khusus pesakit untuk kajian ini diperlukan. Bahan yang digunakan adalah darah vena.

Penilaian keputusan

Ujian PCR berkualiti tinggi mempunyai sensitiviti tertentu, dan bergantung kepada ketepatan penyelidikan dan tahap peralatan di makmal boleh berbeza-beza dari 10 hingga 500 IU / ml.

Ini bermakna jika virus dalam sampel darah hadir pada kepekatan yang sangat rendah (kurang daripada nilai sensitiviti ambang makmal ini), maka hasil untuk pesakit yang sakit boleh "tidak dikesan". Oleh kerana itu, ketika melakukan analisis kualitatif PCR dengan tingkat rendahnya viremia (kepekatan virus rendah), misalnya, untuk pasien yang menjalani terapi antiviral, sangat penting untuk mengetahui ambang sensitivitas sistem diagnostik ini.

Varian sistem diagnostik

Untuk mengawal tindak balas virologi, disyorkan untuk menggunakan sistem diagnostik dengan ambang kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml ketika melakukan rawatan antivirus. Kriteria ini dipenuhi, contohnya dengan analisa Cobas Ampicolor HCV-Test (tepat kepada 50 IU / ml), serta RealBest HCV RNA (dengan kepekaan 15 IU / ml).

Menurut cadangan WHO, untuk menubuhkan diagnosis definitif hepatitis C, hanya perlu berdasarkan asas pengesanan tiga kali RNA virus C pada sampel serum pesakit, dengan ketiadaan jenis penanda hepatitis lain.

Sebagai tambahan kepada kaedah PCR, ujian TMA (kaedah penguatan transkripsi) juga digunakan untuk mengesan RNA HCV pada pesakit. Ia mempunyai ambang kepekaan yang terbaik (5-10 IU / ml), tetapi di negara kita seperti kaedah ujian belum lagi biasa.

Pelbagai pengubahsuaian virus yang dikesan

Seperti penentuan kualitatif dalam serum kehadiran RNA virus Hepatitis C, ia dapat menentukan beberapa genotip virus ini. Pada masa ini, sains tahu lebih daripada enam genotip virus ini, serta kira-kira 10 subtipe penyakit ini.

Di negara kita, virus biasa 1, 2, 3 genotip. Makmal boleh mengesan genotip berikut: 1a dan 1b, 2a, 2b dan 2c, serta 3, 4, 5a dan 6, tanpa mengira subtipe. Untuk semua modifikasi virus, spesifikasi pengesanan adalah 100%.

Analisis Kuantitatif PCR

Menggunakan ujian PCR kuantitatif, tahap kepekatan virus hepatitis dalam sampel darah (viral load) ditentukan. Ujian ini untuk viremia (kepekatan virus) membolehkan anda menentukan bilangan unit bahan genetik tertentu (RNA virus itu sendiri), yang dikesan dalam jumlah tertentu. Dalam kes ini, tentukan kepekatannya dalam 1 ml, yang sepadan dengan 1 cu. lihat

Parameter analisis kuantitatif dinyatakan dalam angka, untuk tujuan ini, satuan antarabangsa (IU) per mililiter (ml), yang disebut sebagai IU / ml, digunakan sebagai unit pengukuran. Sekarang, dalam sesetengah makmal, jumlah virus boleh ditentukan dalam unit lain: bilangan salinan per ml ditunjukkan sebagai salinan / ml.

• Tarikh untuk hepatitis C, analisis kuantitatif PCR yang dilakukan segera sebelum permulaan terapi. Kemudian pada minggu ke-1, ke-4, ke-12 dan ke-24. Penilaian pada minggu ke-12 adalah petunjuk, ia membolehkan untuk menentukan keberkesanan terapi.
• Penyediaan untuk analisis. Untuk melakukan analisis kuantitatif PCR, penyediaan khusus pesakit untuk kajian tidak diperlukan. Setengah jam sebelum pensampelan tidak sepatutnya merokok. Darah vena digunakan sebagai bahan makmal.

Penilaian keputusan

Untuk sistem ujian makmal yang berbeza, terdapat faktor penukaran yang berbeza untuk penunjuk ini dalam IU / ml. Secara purata, mereka mengambil parameter penukaran, di mana 4 salinan / ml = 1 IU / ml. Sebagai contoh, jika makmal memberi hasil analisis PCR 2.4 * 10 6 salinan / ml, maka parameter ini hendaklah dibahagikan kepada 4 dan kita akan mendapat 6 * 10 5 IU / ml.

Beban 800,000 IU / ml dianggap tinggi, yang kira-kira 3,000,000 salinan / ml. Viremia rendah, menurut beberapa pengarang, sesuai dengan parameter PCR kuantitatif di bawah 400,000 IU / ml.

Sebagai hasil daripada ujian kuantitatif, keputusan akhir dapat disampaikan bukan dalam bentuk nilai digital, tetapi: "di bawah julat pengukur", atau "tidak dapat dikesan".

• Penilaian: "di bawah julat ukuran." Ini menunjukkan bahawa ujian kuantitatif gagal untuk mengesan RNA virus hepatitis C, bagaimanapun, virus itu sendiri terdapat di dalam badan dalam kepekatan yang sangat rendah. Ini dibuktikan dengan ujian kualiti tambahan, mengesahkan fakta kehadiran virus itu.
• Penilaian: tidak dikesan. Hasil ini menunjukkan bahawa ujian kuantitatif tidak terdapat dalam sampel RNA virus.

Parameter viral load, pertama sekali, menentukan tahap jangkitan penyakit, tahap "penularan" pesakit. Semakin tinggi kepekatan virus pesakit, semakin besar peluangnya untuk menyebarkannya kepada orang lain. Sebagai contoh, semasa hubungan seks dengan orang yang sakit, atau secara menegak. Penunjuk kuantitatif ini juga membantu menentukan keberkesanan rawatan pesakit.

Mengendalikan analisis kuantitatif PKK adalah penting untuk terapi antiviral, menilai kejayaannya dan merancang tempoh kursus. Oleh itu, dengan tindak balas pantas badan untuk rawatan dan tahap viremia yang rendah, tempoh terapi dapat dikurangkan.

Jika parameter PCR kuantitatif perlahan dikurangkan, terapi antiviral perlu dilanjutkan atau diubah suai. Sekiranya tahap beban virus adalah rendah, maka ini adalah faktor yang menggalakkan dalam terapi, jika dinaikkan, maka kaedah yang digunakan tidak berkesan dan ubat-ubatan atau kaedah penggunaannya harus diubah.

Analisis kualitatif dan kuantitatif PCR untuk hepatitis C: negatif, positif, transkrip

Hepatitis C adalah penyakit hati virus yang disebabkan oleh HCV flavivirus (dari virus hepatitis C Bahasa Inggeris), struktur yang mengandungi molekul asid ribonucleic (RNA). RNA membawa kod genetik virus. Kehadirannya membolehkan analisis PCR untuk hepatitis C.

Bahaya HCV untuk seseorang terletak pada hakikat bahawa tetingkap yang disebut serologi (masa antara jangkitan dan penampilan reaksi dari sistem imun) boleh agak lama - dari beberapa minggu hingga enam bulan.

Ia tidak mengesan jangkitan dan memulakan rawatan mengikut masa.

Bergantung kepada ciri-ciri individu organisma, pembawa HCV dapat nyata dalam bentuk akut, dan juga berlaku sebagai penyakit kronik yang memerlukan rawatan yang panjang dan mahal. Dalam mengesan antibodi kepada HCV, satu siri ujian makmal dijalankan, termasuk PCR untuk hepatitis C. Ujian ini dilakukan kepada semua orang yang antibodi darahnya ditemui oleh HCV.

Apakah analisis PCR?

Analisis makmal PCR untuk hepatitis C - kajian bahan biologi untuk mengenal pasti kehadiran flavavirus.

Reaksi rantai polimerase (sebagai singkatan bermaksud) menunjukkan nilai kuantitatif kerosakan virus tubuh, ciri kualitatif, serta genotip virus yang mengandungi RNA.

Secara asasnya, serta berdasarkan analisis tambahan, kaedah dan durasi terapi, serta faktor epidemiologi (tahap risiko penularan ke pembawa lain) ditentukan.

Apakah Analisis RNA Hepatitis C?

Hepatitis C PCR juga dipanggil analisis RNA (RNA HCV), kerana Flavavirus mengandungi zarah RNA dengan saiz virion 30-60 nm. Salah satu ciri mikroorganisma ini adalah kecenderungan mutasi tinggi.

Setiap subspesies (genotip) virus mempunyai rintangan yang berbeza, yang menyebabkan kaedah rawatan yang berbeza dan sifat prognosis lanjut untuk pesakit.

Bahan biologi (darah vena) diberikan pada perut kosong dan, sebagai peraturan, diuji oleh kaedah PCR Masa Nyata (diagnostik masa nyata yang sangat sensitif dengan had pengesanan yang lebih rendah sebanyak 15 IU / ml menggunakan sistem automatik tertutup).

Terdapat ujian lain, contohnya COBAS AMPLICOR dengan kepekaan 50-100 IU / ml. Bagi mana-mana ujian makmal, ambang kepekaan adalah penting, iaitu keupayaan reagen untuk mengesan kepekatan minimum virus dalam bahan biologi.

Jenis analisis untuk hepatitis C oleh PCR

Hepatitis C PCR merangkumi tiga komponen penting:

• analisis kualitatif;
• analisis kuantitatif;
• genotyping.

Ujian ini boleh menentukan sifat viremia, serta ciri genetik patogen. Bergantung pada sensitiviti sistem diagnostik, kajian ini dijalankan sekali, dan kadang-kadang ujian kedua dilakukan dengan reagen yang lebih sensitif untuk mengesahkan atau memperbaiki hasilnya.

PCR hepatitis C berkualiti tinggi

Kualitatif analisis Hepatitis C PCR adalah satu lagi nama biasa untuk analisis reaksi rantai polimerase. Kepekaan standard ujian, yang membolehkan untuk mengesan kehadiran lesi virus, berada dalam lingkungan 10-500 IU / ml.

Analisis PCR negatif untuk hepatitis C menunjukkan bahawa kepekatan virus di dalam darah pesakit adalah di bawah ambang kerentanan sistem diagnostik.

Jika PCR berkualiti tinggi memberikan jawapan "tidak dikesan", maka untuk rawatan berikutnya adalah penting untuk mengetahui ambang kepekaan reagen.

Fraksi protein untuk flavavirus muncul lebih lama.

PCR Kuantitatif Hepatitis C

Kuantitatif Hepatitis C PCR adalah penunjuk beban virus, yang mencerminkan tahap kepekatan RNA flavavirus dalam tubuh. Ini adalah penunjuk yang menunjukkan berapa banyak serpihan RNA virus yang terkandung setiap sentimeter kubik darah. Hasil PCR hepatitis C RNA dalam ujian kuantitatif dalam sistem konvensional ditunjukkan dalam unit internasional per mililiter (IU / ml) dan dapat direkam dalam berbagai cara, contohnya, 1.7 juta atau 1.700.000 IU / ml.

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C ditetapkan kepada pesakit sebelum permulaan terapi antiviral, dan pada minggu 12 rawatan, untuk menilai hasil kaedah yang dipilih untuk berurusan dengan HCV. Beban virus membolehkan menentukan tiga petunjuk penting penyakit:

• infeksi, iaitu. tahap risiko penghantaran virus dari satu pembawa ke yang lain (semakin tinggi kepekatan RNA flavavirus, semakin tinggi kebarangkalian menjangkiti orang lain, misalnya, melalui hubungan seksual);
• kaedah dan keberkesanan rawatan;
• tempoh dan prognosis terapi antiviral (semakin tinggi beban virus, semakin lama rawatan berlangsung).

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C bergantung kepada jenis ujian makmal dan ambang kepekaannya. Batasan yang lebih rendah dari norma dianggap sebagai penunjuk hingga 600.000 IU / ml, nilai rata-rata berada dalam kisaran 600.000-700.000 IU / ml. Keputusan 800.000 IU / ml dan ke atas dianggap sebagai virus yang mengandungi RNA yang tinggi.

Genotyping

Oleh kerana aktiviti mutasi HCV yang tinggi, semasa ujian, adalah penting untuk mengenal pasti genotip virus yang ada di dalam darah pesakit. Secara keseluruhan, 11 genotip virus hepatitis C telah direkodkan di planet ini, termasuk banyak subspesies (subtipe). Di wilayah Persekutuan Rusia mengagihkan 1,2 dan 3.

RNA PCR Hepatitis C bersama-sama dengan genotip adalah komponen analisis yang sangat penting, sejak membolehkan doktor menentukan rintangan (rintangan) virus, memilih ubat-ubatan yang sesuai dan menetapkan kursus rawatan.

Genotyping juga membenarkan penentuan tidak langsung keadaan hati. Sebagai contoh, 3 genotip HCV sering diiringi oleh steatosis, di mana lemak terkumpul di dalam sel-sel organ.

Ujian darah untuk PCR untuk hepatitis C harus menghasilkan angka yang menentukan genotip tersebut. Maklum balas makmal boleh mengatakan "tidak ditaip" - dan ini bermakna bahawa virus adalah dalam darah manusia yang tidak dikesan oleh sistem ujian. Ini mungkin menunjukkan bahawa genotip tidak tipikal untuk kawasan geografi yang diberikan. Dalam kes ini, anda perlu mengulangi analisis dengan kepekaan yang tinggi terhadap sistem diagnostik.

Pengkodan analisis PCR untuk hepatitis C

Ujian untuk dekripsi kuantitatif hepatitis C PCR boleh berdasarkan pada data di atas. Apabila memperoleh keputusan ujian makmal, data berikut biasanya ditulis:

• "Found" / "tidak dijumpai" (PCR berkualiti tinggi untuk hepatitis C);
• bilangan pecahan yang mengandungi RNA, contohnya 831.680 ME / ml (analisis PCR kuantitatif);
• angka yang menentukan genotip HCV, sebagai contoh - 1, 2, 3, 4;
• Nama ujian paling kerap adalah Real-time.

Perkara yang paling penting dalam menafsirkan analisis PCR untuk hepatitis C adalah item kedua, yang menunjukkan beban virus, yang menentukan prognosis, kaedah dan tempoh rawatan.

Sekiranya ujian PCR untuk hepatitis C adalah negatif, dan ELISA adalah positif - apakah maksudnya?

Untuk menguraikan ujian makmal, adalah penting untuk menghubungi pakar hepatologi atau pakar penyakit berjangkit yang akan menjelaskan maklumat yang diperolehi mengikut jenis sistem diagnostik dan kepekaan ambangnya. Dalam amalan perubatan, terdapat banyak data ujian darah yang boleh menyesatkan seseorang tanpa pendidikan perubatan.

Sebagai contoh, jika ujian untuk hepatitis C PCR adalah negatif dan ELISA adalah positif, ia mungkin bermakna bahawa tidak ada HCV dalam darah pesakit pada masa ini, tetapi dia pernah mengalami bentuk hepatitis C. Ia dipercayai bahawa ujian imunosorben berkaitan enzim positif (ELISA) menunjukkan bahawa terdapat antibodi dalam darah yang telah dihasilkan selepas pencerobohan virus pada masa lalu. Tetapi dalam amalan perubatan moden, analisis ELISA dianggap tidak dapat dipercayai dan sering memberikan hasil yang tidak tepat, jadi doktor menggunakannya sebagai pemeriksaan utama. Apabila mendiagnosis penyakit, pakar dipandu dengan tepat oleh ujian PCR.

Video berguna

Video berikut memberitahu dengan cara yang sangat terperinci dan menarik apakah intipati kaedah PCR, bagaimana analisis dijalankan:

Kesimpulannya

Untuk analisis PCR hepatitis C, darah vena biasanya diambil. Selalunya terdapat pengambilan bahan biologi berganda - untuk ELISA, dan secara langsung untuk ujian PCR. Untuk keputusan ujian yang betul, pematuhan dengan peraturan asas untuk pengumpulan makmal bahan biologi diperlukan:

• darah untuk analisis diberikan pada separuh pertama hari perut kosong;
• antara pengambilan makanan dan darah perlu mengambil masa sekurang-kurangnya 8 jam;
• Makanan alkohol dan goreng juga harus dikecualikan sebelum mengambil ujian.
• pada siang hari sebelum derma darah adalah perlu untuk mengelakkan penuaan fizikal yang tinggi.

Keputusan ujian darah biasanya siap pada hari berikutnya.