Hepatitis B PCR

Ketersediaan dadah anti-hepatitis B (HBV) yang moden dengan petunjuk jelas untuk pentadbiran mereka memerlukan pengesahan diagnosis yang tepat dan cepat. Walau bagaimanapun, disebabkan oleh data klinikal yang langka pada minggu pertama penyakit dan kaedah analisa immunoassay yang terhad, kadar diagnosis menurun.

Kehadiran penanda anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe membolehkan anda mengesahkan HBV atau membuktikan fakta penyakit terdahulu. Tetapi ada kemungkinan untuk menentukan kehadiran zarah-zarah virus aktif dalam darah dan mengira bilangan mereka pada masa kajian oleh PCR - ujian masa nyata kuantitatif untuk mengesan hepatitis B. Cara ini, berbanding dengan kaedah diagnostik ELISA, menyelesaikan masalah diagnostik dan membolehkan untuk meramal perjalanan penyakit semasa menerima ubat anti virus.

Asas Diagnosis Penyakit

Diagnosis hepatitis B adalah berdasarkan penilaian manifestasi klinikal, enzyme immunoassay dan kaedah penyelidikan instrumental. Penyakit ini berlaku dalam fasa akut selepas tempoh inkubasi dan, bergantung kepada dos jangkitan dan keberkesanan rawatan, memasuki peringkat kronik. Matlamat utama rawatan adalah untuk mencegah penyekaran, iaitu penghapusan semua zarah virus dari darah. Kursus klinikal penyakit ini adalah penawar tanpa viremia berikutnya.

Fakta menghapuskan jangkitan mesti dibuktikan dengan kaedah penyelidikan kuantitatif.

Memandangkan mana-mana enzim immunoassay kualitatif memungkinkan untuk mendiagnosis HBV secara tidak langsung, iaitu, ia tidak menunjukkan kehadiran patogen dalam persekitaran dalaman badan, tetapi mencirikan tindak balas imun terhadap jangkitan, memantau keberkesanan terapi dan hakikat penyembuhan menjadi sukar untuk dibuktikan. Oleh itu, pesakit dengan hepatitis B atau dengan kehadiran kriteria diagnostik yang memihak kepadanya harus dilakukan tindak balas rantai polimerase untuk mengkuantifikasi jumlah zarah virus dalam darah. Kadar diagnostik adalah kekurangan salinan DNA jangkitan.

Huraian kaedah diagnostik

Kaedah diagnostik PCR yang sangat sensitif terhadap hepatitis B tergolong dalam kategori kajian biologi molekul yang dihasilkan secara genetik. Melaluinya ditentukan oleh jumlah DNA virus dalam bahan biologi pesakit dan kadar yang dibenarkan. Menurut hasil yang diperoleh, jumlah zarah virus per unit volum didirikan. Bahan untuk ujian diagnostik adalah darah vena pesakit. Pengambilan adalah wajar pada perut kosong kerana kesan serigala chyle mungkin terhadap hasil kajian.

Keputusan yang diperoleh mesti diberikan kepada doktor untuk tafsiran dan penentuan taktik yang lebih lanjut. Pengekodan bebas tidak mewakili nilai diagnostik.

Kepentingan hasil bilangan zarah virus yang diperolehi dengan kaedah PCR melebihi nilai immunoassays enzim. Oleh kerana analisis dalam mod masa nyata menunjukkan kehadiran agen penyebab penyakit dalam darah, kandungan maklumatnya lebih tinggi daripada yang lain. Jika ELISA hanya menunjukkan kehadiran antibodi, yang diperhatikan dari 4 minggu tempoh inkubasi dan berlangsung lebih dari 8 minggu selepas penghapusan virus daripada darah, tindak balas rantai polimerai dengan jelas mengesahkan penyakit aktif penyakit ini atau penyembuhannya, mencirikan dinamik terapi yang ditetapkan.

Tindak balas rantai polimerase dengan penentuan kuantitatif bagi partikel patogen menyelesaikan soalan diagnostik yang memihak kepada berhenti rawatan akibat pemulihan atau terapi berterusan kerana kurangnya keberkesanannya. Kaedah ini adalah spesifik yang mungkin untuk virus HBV dan dibezakan oleh ralat yang boleh diterima.

Indikasi dan objektif prestasi

Analisis kuantitatif hepatitis B adalah yang paling boleh dipercayai dan membolehkan anda mengesahkan data yang diperolehi oleh kaedah ELISA. Dia dilantik ketika:

1. memperoleh keputusan diagnostik positif ELISA;
2. merawat pesakit dengan diagnosis mantap kerosakan hati virus;
3. dalam diagnosis hepatitis campuran etiologi;
4. jika perlu, tentukan beban virus dalam pesakit.

Oleh kerana kaedah immunoassay enzim digunakan secara meluas dalam amalan pakar penyakit berjangkit, sesetengah pesakit dengan penyakit ringan boleh dirawat tanpa perlu mengira beban virus. Tetapi PCR umumnya dianggap sebagai "standard emas" diagnostik dalam hepatologi, kerana, disebabkan oleh keunikan hasilnya, ia menghilangkan beberapa isu organisasi. Oleh itu, arahan pesakit untuk analisis kuantitatif mempunyai objektif berikut:

• mendapatkan data mengenai jumlah zarah virus dalam darah pesakit;
• pengesahan kursus hepatitis akut dan pengesahan penyakit kronik yang tepat pada masanya;
• pengesanan berterusan pembawa virus laten dengan ujian ELISA positif, memantau viremia mereka;
• membuat keputusan mengenai pelantikan rawatan antivirus, gabungan dan penamatannya.

Matlamat yang paling penting untuk menggunakan ujian PCR kuantitatif untuk mengesan HBV adalah untuk mengenal pasti kemungkinan kombinasi rawatan. Dalam kes-kes beban virus yang tinggi, hasil analisis memberikan pakar peluang untuk meneruskan kombinasi ubat-ubatan. Semasa terapi, mudah untuk menentukan keberkesanan rawatan farmakologi yang ditetapkan berdasarkan keputusan PCR. Dibimbing hanya dengan data kaedah imunofermental, adalah mustahil untuk menentukan secara tepat hak rawatan dan keberkesanan semasa. Oleh itu, ujian masa nyata kuantitatif adalah analisis yang diperlukan sebelum memulakan rawatan untuk hepatitis akut, jangkitan virus laten dengan viremia tinggi dan HBV kronik.

Tafsiran hasil ujian PCR kuantitatif

Tafsiran hasil ujian PCR kuantitatif perlu dijalankan oleh doktor yang menghadiri pesakit. Adalah perlu untuk menilai penunjuk diagnostik dan menentukan taktik terapeutik.

Penganalisis piawai mampu menghasilkan petunjuk kuantitatif yang mencerminkan bilangan salinan DNA virus yang ada dalam darah vena yang dikaji. Unit ukuran - salinan / ml, IU / ml (salinan bagi setiap mililiter, unit antarabangsa bagi setiap mililiter). Tafsiran hasil diberikan dalam jadual dengan menunjukkan unit pengukuran yang berlainan.

Kajian mengenai virus hepatitis B (ELISA dan PCR)

Hepatitis B virus "s" antigen (HBsAg)

Antigen permukaan Hepatitis B dalam serum biasanya tidak hadir.
Pengesanan antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) dalam serum mengesahkan jangkitan akut atau kronik dengan virus hepatitis B.

Dalam penyakit akut, HBsAg dikesan dalam serum dalam 1-2 minggu terakhir tempoh inkubasi dan 2-3 minggu pertama dalam tempoh klinikal. Sirkulasi HBsAg dalam darah mungkin terhad kepada beberapa hari, jadi anda harus berusaha untuk pemeriksaan awal awal pesakit. Kaedah ELISA membolehkan mengesan HBsAg di lebih daripada 90% pesakit. Hampir 5% pesakit, kaedah penyelidikan yang paling sensitif tidak mengesan HBsAg, dalam kes-kes seperti etiologi hepatitis B virus disahkan oleh kehadiran anti-HBcAg JgM atau PCR.

Kepekatan HBsAg serum dalam semua bentuk keparahan hepatitis B pada ketinggian penyakit ini mempunyai pelbagai turun naik yang signifikan, namun ada corak tertentu: dalam tempoh akut ada hubungan songsang antara konsentrasi serum HBsAg dan keparahan penyakit.

Kepekatan HBsAg yang tinggi adalah lebih biasa dalam bentuk penyakit ringan dan sederhana. Dalam bentuk yang teruk dan malignan, kepekatan HBsAg dalam darah seringkali rendah, dan pada 20% pesakit dengan bentuk teruk dan dalam 30% dengan antigen malignan di dalam darah mungkin tidak dapat dikesan sama sekali. Penampilan latar belakang ini pada pesakit dengan antibodi kepada HBsAg dianggap sebagai tanda diagnostik yang tidak baik; ia ditentukan dalam bentuk-bentuk hepatitis B.

Dalam akut akut hepatitis B, kepekatan HBsAg dalam darah secara beransur-ansur berkurang sehingga hilangnya antigen ini. HBsAg menghilangkan kebanyakan pesakit dalam masa 3 bulan dari permulaan jangkitan akut.

Penurunan kepekatan HBsAg lebih daripada 50% menjelang akhir minggu ke-3 tempoh akut, sebagai peraturan, menunjukkan proses jangkitan yang hampir selesai. Biasanya pada pesakit dengan kepekatan tinggi HBsAg pada ketinggian penyakit ini, ia dikesan dalam darah selama beberapa bulan.
Pada pesakit dengan kepekatan rendah HBsAg menghilang lebih awal (kadang-kadang beberapa hari selepas permulaan penyakit). Pada amnya, masa pengesanan HBsAg berkisar antara beberapa hari hingga 4-5 bulan. Tempoh maksimum pengesanan HBsAg dengan kursus lancar hepatitis B akut tidak melebihi 6 bulan dari permulaan penyakit.

HBsAg boleh didapati di kalangan orang yang sihat, sebagai peraturan, dalam kajian profilaksis atau tidak sengaja. Dalam kes sedemikian, penanda lain hepatitis B virus, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg, diperiksa dan fungsi hati dipelajari.

Sekiranya keputusan negatif, kajian berulang pada HBsAg diperlukan.
Sekiranya ujian darah berulang selama lebih dari 3 bulan mendedahkan HBsAg, pesakit ini dikelaskan sebagai pesakit kronik dengan hepatitis B.
Kehadiran HBsAg adalah perkara biasa. Terdapat lebih daripada 300 juta syarikat penerbangan di dunia, dan di negara kita terdapat sekitar 10 juta syarikat penerbangan.
Penamatan peredaran HBsAg dengan seroconversion seterusnya (pembentukan anti-HBs) selalu menandakan pemulihan badan.

Ujian darah untuk kehadiran HBsAg digunakan untuk tujuan berikut:

untuk diagnosis hepatitis akut B:

• tempoh pengeraman;
• penyakit akut;
• pemulihan awal;
  

untuk diagnosis hepatitis B virus kronik;

untuk penyakit:

• hepatitis kronik yang berterusan;
• sirosis hati;

untuk pemeriksaan dan mengenal pasti pesakit dalam kumpulan risiko:

pesakit dengan hemotransfusi yang kerap;

pesakit dengan kegagalan buah pinggang kronik;

pesakit dengan pelbagai hemodialisis;

pesakit dengan keadaan imunodefisiensi, termasuk AIDS.

Penilaian hasil penyelidikan

Hasil kajian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan ketiadaan serum HBsAg. Hasil positif - pengenalan HBsAg menunjukkan tempoh inkubasi atau akut hepatitis B virus akut, serta dalam hepatitis B. Virus kronik

Antibodi kepada antigen nuklear virus hepatitis B JgG (anti- HBcAg JgG)

Biasanya, serum anti-HBcAg tidak hadir dalam serum.
Pada pesakit dengan anti-HBcAg JgG muncul dalam tempoh akut hepatitis B virus dan berterusan sepanjang hayat. Anti-HBcAg JgG adalah penanda utama pemindahan HBV.

Ujian darah untuk anti-HBcAg JgG digunakan untuk mendiagnosis:

hepatitis B virus kronik dengan kehadiran antigen HBs dalam serum;

hepatitis B. virus

Penilaian hasil penyelidikan

Hasil kajian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan ketiadaan serum anti-HBcAg JgG. Hasil positif - pengenalan anti-HBcAg JgG menunjukkan jangkitan akut, pemulihan atau sebelum pemindahan virus hepatitis B.

Hepatitis B virus "e" antigen (HBeAg)

Biasanya, HBeAg dalam serum tidak hadir.
HBeAg boleh dijumpai dalam serum kebanyakan pesakit dengan hepatitis B. Virus akut biasanya hilang dalam darah sebelum antigen HBs. Tahap tinggi HBeAg pada minggu pertama penyakit atau pengesanannya selama lebih dari 8 minggu memberikan alasan untuk mengesyaki jangkitan kronik.

Antigen ini sering dikesan dalam hepatitis aktif kronik etiologi virus. Kepentingan tertentu dalam definisi HBeAg adalah fakta bahawa pengesanannya mencirikan fasa replikasi aktif proses menular. Telah ditubuhkan bahawa kepekatan tinggi HBeAg sesuai dengan aktiviti polimerase DNA yang tinggi dan mencirikan replikasi aktif virus.

Kehadiran HBeAg dalam darah menunjukkan jangkitan yang tinggi, i.e. Kehadiran jangkitan hepatitis B aktif dalam badan yang diperiksa, dan hanya dapat dikesan dengan kehadiran antigen HB dalam darah. Pada pesakit dengan hepatitis aktif kronik, ubat antiviral hanya digunakan apabila HBeAg dikesan dalam darah. HBeAg - antigen - penanda fasa akut dan replikasi virus hepatitis B.

Ujian darah untuk kehadiran antigen HBe digunakan untuk mendiagnosis:

tempoh inkubasi hepatitis B virus;

tempoh prodromal hepatitis B virus;

tempoh akut hepatitis B virus;

hepatitis B. virus kronik berterusan

Penilaian hasil penyelidikan

Hasil kajian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan ketiadaan serum HBeAg. Hasil positif - pengesanan HBeAg menunjukkan tempoh inkubasi atau akut hepatitis B virus akut atau replikasi berterusan virus dan jangkitan pesakit.

Antibodi kepada antigen "e" virus hepatitis B (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg dalam serum biasanya tidak hadir. Penampilan anti-HBeAg antibodi biasanya menunjukkan penyingkiran intensif dari badan virus hepatitis B dan jangkitan kecil pesakit.

Antibodi ini muncul dalam tempoh yang teruk dan berterusan sehingga 5 tahun selepas jangkitan. Dalam hepatitis berterusan kronik, anti-HBeAg terdapat dalam darah pesakit bersama dengan HBsAg. Serokonversi, i.e. peralihan HBeAg ke anti-HBeAg, dengan hepatitis aktif kronik, lebih kerap prognostically menguntungkan, tetapi serokonversi yang sama tidak memperbaiki prognosis transformasi hati kirrotik yang teruk.

Ujian darah untuk kehadiran anti-HBeAg digunakan dalam kes berikut dalam diagnosis hepatitis B virus:

menubuhkan peringkat awal penyakit;

jangkitan akut;

pemulihan awal;

pemulihan;

pemulihan peringkat lewat.

diagnosis virus hepatitis B yang baru dipindahkan;

diagnosis hepatitis B. virus kronik berterusan

Penilaian hasil penyelidikan

Hasil kajian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan ketiadaan antibodi untuk HBeAg dalam serum. Hasil positifnya adalah pengesanan antibodi kepada HBeAg, yang mungkin menunjukkan tahap awal hepatitis B virus akut, tempoh jangkitan akut, peringkat awal penyembuhan, pemulihan, baru-baru ini memindahkan hepatitis B virus atau hepatitis B. Virus yang berterusan

Kriteria untuk kehadiran hepatitis B kronik adalah:

mengesan atau secara berkala mengesan DNA HBV dalam darah;

peningkatan berterusan atau berkala dalam aktiviti ALT / AST dalam darah;

tanda morfologi hepatitis kronik dalam pemeriksaan histologi biopsi hati.

Pengesanan virus hepatitis B oleh PCR (secara kualitatif)

Virus Hepatitis B dalam darah biasanya tidak wujud.
Penentuan kualitatif virus hepatitis B oleh kaedah PCR dalam darah menjadikannya dapat mengesahkan kehadiran virus di dalam tubuh pesakit dan dengan itu menubuhkan etiologi penyakit.

Kajian ini memberikan maklumat berguna untuk diagnosis hepatitis B virus akut di dalam inkubasi dan peringkat perkembangan awal penyakit ini, apabila penanda serologi utama pesakit dalam darah mungkin tidak hadir. DNA virus serum dikesan dalam 50% pesakit jika tiada HBeAg. Kepekaan analitikal kaedah PCR tidak kurang daripada 80 zarah virus dalam 5 μl, sampel pengesanan DNA terakhir, kekhususan - 98%.

Kaedah ini penting untuk mendiagnosis dan memantau perjalanan HBV kronik. Kira-kira 5-10% daripada kes sirosis dan penyakit hati kronik yang lain disebabkan oleh pembawa kronik virus hepatitis B. Penanda aktiviti penyakit tersebut adalah kehadiran HBeAg dan DNA virus hepatitis B dalam darah.

Kaedah PCR memungkinkan untuk menentukan darah DNA DNA virus hepatitis B secara kualitatif dan kuantitatif. Serpihan yang ditentukan dalam kedua-dua kes adalah urutan DNA unik gen protein protein virus hepatitis B.

Pengesanan DNA virus hepatitis B dalam biomaterial menggunakan PCR adalah perlu untuk:

penyelesaian keputusan ujian serologi yang dipersoalkan;

pengesanan tahap akut penyakit berbanding dengan jangkitan atau hubungan sebelumnya;

mengawal keberkesanan rawatan antiviral.

Kehilangan DNA hepatitis B dari darah adalah tanda keberkesanan terapi

Pengesanan virus hepatitis B oleh PCR (kuantitatif)

Kaedah ini memberikan maklumat penting mengenai intensiti perkembangan penyakit, keberkesanan rawatan dan pembangunan rintangan terhadap ubat aktif.
Untuk diagnosis hepatitis virus oleh PCR dalam serum, sistem ujian digunakan, sensitiviti yang 50-100 salinan dalam sampel, yang memungkinkan untuk mengesan virus pada kepekatan 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 salinan / ml. PCR dalam hepatitis B virus semestinya perlu untuk menilai replikasi virus.

DNA virus serum dikesan dalam 50% pesakit jika tiada HBeAg. Serum darah, limfosit, dan hepatobiopsi boleh menjadi bahan untuk mengesan DNA virus hepatitis B.

• Penilaian tahap viremia adalah seperti berikut:
• kurang daripada 2.10 ^ 5 salinan / ml (kurang daripada 2.10 ^ 5 IU / ml) - viremia rendah;
• dari 2.10 ^ 5 salinan / ml (2.10 ^ 5 IU / ml) kepada 2.10 ^ 6 salinan / ml (8.10 ^ 5 IU / ml) - viremia sederhana;
• lebih daripada 2.10 ^ 6 salinan / ml - viremia tinggi.

Terdapat hubungan antara hasil hepatitis B virus akut dan kepekatan DNA HBV dalam darah pesakit. Dengan tahap viremia yang rendah, proses penjadualan jangkitan hampir sama dengan sifar, dengan purata, proses itu dikira pada 25-30% pesakit, dan dengan tahap viremia yang tinggi, hepatitis B virus akut yang paling sering menjadi kronik.

Tanda-tanda untuk rawatan interferon-alfa HBV kronik harus dianggap sebagai penanda tanda-tanda replikasi virus aktif (pengesanan HBV HBV, HBeAg dan DNA HBV dalam serum darah dalam tempoh 6 bulan sebelumnya.).

Kriteria untuk menilai keberkesanan rawatan adalah kehilangan HBEAg dan DNA HBV dalam darah, yang biasanya disertai dengan normalisasi tahap transaminase dan pengampunan jangka panjang penyakit, HBV DNA menghilang dari darah pada bulan ke-5 rawatan dalam 80% pesakit. Mengurangkan tahap viremia sebanyak 85% atau lebih pada hari ketiga dari permulaan rawatan berbanding dengan garis dasar adalah kriteria yang cepat dan tepat untuk meramal keberkesanan terapi.

Analisis PCR untuk Hepatitis B

Virus DNA keluarga Hepadnaviridae adalah agen penyebab langsung hepatitis B. Analisis PCR terhadap hepatitis B membolehkan kehadiran virus DNA yang dijangkiti dapat dikesan dalam darah pesakit. Hasil daripada jenis positif pada DNA HBV menunjukkan kehadiran jangkitan dalam darah pesakit. Perlu diingatkan bahawa diagnosis melalui penggunaan analisis PCR tidak hanya dapat menentukan kehadiran jangkitan, tetapi juga beban dan aktivitas kuantitatifnya. Kaedah ini boleh dipercayai, tepat dan boleh dihasilkan. Mengkuasi DNA HBV dengan qPCR boleh digunakan untuk memantau keberkesanan terapi HBV dan bermanfaat untuk memahami sejarah semula jadi HBV di kawasan endemik.

Proses jangkitan dengan hepatitis B berlaku melalui hubungan domestik atau seksual - melalui hubungan langsung dengan darah yang dijangkiti. Selepas jangkitan, virus memasuki sel hati, di mana ia terus membiak aktif. Melalui aliran darah, sel-sel patogenik merebak ke seluruh badan. Perlu diingat bahawa sel-sel hepatitis B sangat tahan terhadap asid dan suhu tinggi. Dia mampu mengekalkan sifatnya yang merosakkan selama enam bulan.

Jenis PCR untuk Hepatitis B

Sehingga kini, terdapat dua jenis diagnostik yang ditetapkan jika anda mengesyaki kehadiran virus hepatitis B: PCR kualitatif (membolehkan anda menentukan dengan ketepatan 100% kehadiran virus dalam darah) dan PCR kuantitatif (membolehkan anda menentukan tahap aktiviti virus).

PCR berkualiti tinggi ditetapkan sekiranya terdapat kecurigaan terhadap jangkitan HBV, atau jika kaedah diagnostik lain tidak menghasilkan hasil yang jelas. Analisis PCR jenis ini sangat mudah untuk dijelaskan: negatif (tiada virus dikesan dalam darah), positif (dikesan dalam darah). Tugas utama analisis kualitatif adalah menentukan kehadiran sel yang dijangkiti pada peringkat awal penyakit. Jika virus itu didiagnosis dua minggu selepas jangkitan yang dikatakan, keberkesanan rawatan akan lebih tinggi. Jika virus dalam darah kira-kira dua bulan, penyakit itu menjadi kronik, oleh itu, tidak dapat sembuh sepenuhnya.

Jika diagnosis kualitatif mengesahkan kehadiran HBV dalam darah, doktor menetapkan analisis kuantitatif.

Analisis kuantitatif membolehkan menentukan perkembangan virus dalam tubuh pesakit. Analisis PCR jenis ini diberikan kepada:

• untuk menentukan peringkat penyakit;
• untuk memantau keberkesanan terapi yang digunakan;
• untuk menentukan tahap rintangan virus kepada ubat tertentu;
• untuk pemilihan dadah.

Penunjuk kuantitatif virus dalam darah diukur dalam IU per mililiter atau DNA per mililiter.

Jika doktor menetapkan diagnosis kuantitatif dengan segera, tanpa memeriksa kualiti, maka kadarnya ialah 75 IU setiap mililiter. Sekiranya kurang unit antarabangsa dikesan, hasilnya adalah bahawa HBV tidak dikesan apabila angka-angka di atas normal, kehadiran hepatitis B virus didiagnosis.

Tafsiran diagnosis kuantitatif

Petunjuk berikut (dalam salinan / mililiter) dianggap sebagai norma CRP dalam hepatitis B: kurang daripada 10 3 - virus tidak aktif; dari 10 4 hingga 10 5 - virus biasanya tidak aktif; 10 6 - virus aktif; 10 7 - virus dalam tahap tinggi aktiviti.

Berdasarkan penunjuk kuantitatif seseorang dapat menentukan dengan ketepatan 100% bentuk penyakit (pembawa, akut atau kronik), tindak balas virus untuk rawatan, keperluan diagnostik tambahan.

Bentuk kronik hepatitis B ditubuhkan sekiranya aktiviti virus adalah 10 5 keping setiap mililiter. Seorang pembawa didiagnosis jika markahnya berada di bawah 10 5 salinan setiap mililiter.

Dalam tempoh rawatan, adalah perlu untuk kerap (sekali setiap tiga bulan) mengulangi diagnostik kuantitatif untuk mempertimbangkan masa dalam masa apabila virus itu mengembangkan imuniti kepada ubat-ubatan yang digunakan dan mengubah kaedah itu. Sekiranya semua kajian telah dilakukan dengan betul dan rawatan yang berkesan telah dipilih, analisis yang berulang (selepas tiga hari rawatan) akan menunjukkan penurunan aktiviti sel patogen oleh sekurang-kurangnya lapan puluh lima peratus.

Biopsi hati dilakukan hanya dalam kes apabila enam bulan rawatan telah menunjukkan bahawa tahap ALT adalah dua kali lebih tinggi daripada biasa, dan diagnostik PCR menunjukkan kadar lebih rendah daripada 10 5 salinan setiap mililiter darah.

Menyediakan kajian

Darah Venous diperlukan untuk analisis. Untuk mendapatkan hasil yang paling tepat, perlu menyediakan prosedur: enggan mengambil makanan sekurang-kurangnya lapan jam sebelum pengumpulan darah; selama dua hari untuk menolak rawatan dadah (adalah penting untuk memberi amaran kepada doktor tentang mengambil dadah); anda mesti menghabiskan dua puluh minit dalam mod rehat sebelum menderma darah; Dua belas jam sebelum prosedur, melepaskan latihan sukan, minuman beralkohol, merokok dan makan makanan berlemak.

Adalah penting: jika diagnosis diperlukan untuk kanak-kanak di bawah umur lima bulan, maka dia perlu memberi segelas air rebus setiap sepuluh minit enam puluh minit sebelum prosedur pengumpulan darah.

Menyimpulkan

Analisis PCR untuk hepatitis B hari ini adalah kaedah yang paling tepat untuk mendiagnosis virus. Kaedah ini membolehkan untuk menentukan bentuk mutasi dan tersembunyi penyakit ini, untuk mendiagnosis penyakit pada hari-hari pertama jangkitan, oleh itu, untuk memilih rawatan yang paling berkesan. Pembantu makmal membandingkan keputusan analisa dengan norma, dan kemudian membawa mereka ke kesimpulan. Data diproses dalam masa dua minggu. Untuk mendapatkan rujukan untuk analisis PCR, adalah perlu untuk menghubungi pakar hepatologi, pakar penyakit berjangkit atau pakar virologi. Adalah penting untuk diingat bahawa lebih cepat anda mendapatkan doktor, lebih cepat hasilnya akan diperolehi, oleh itu, rawatan yang lebih berkesan adalah.

Penjelasan mengenai PCR dan analisis biokimia terhadap hepatitis

Hepatitis adalah proses keradangan di hati akibat daripada pemusnahan sel-selnya oleh bahan-bahan toksik. Memecahkan analisis untuk hepatitis memungkinkan untuk menilai secara objektif keadaan kesihatan pesakit yang mengidap penyakit hati. Doktor penyakit berjangkit akan memberitahu anda bagaimana untuk memahami hasil kajian, dan menetapkan rawatan lanjut. Pesakit, setelah mengkaji secara bebas data yang diperoleh, menarik kesimpulan tertentu, yang tidak selalu sesuai dengan realiti.

Virus Hepatitis B terkandung di dalam serum dan kaedah diagnostik makmal tertentu membenarkan pengesanan antigen dan antibodi patogen.

Senarai Ujian Hepatitis

Diagnosis keradangan virus hati disahkan oleh kajian khusus. Sebelum menjalani terapi, pesakit diuji:

1. Pesakit menyediakan darah untuk penyelidikan pada waktu pagi, antara 7.00 dan 9.00. Pesakit harus berhenti makan selama 12 jam. Analisis kuantitatif hepatitis B menentukan kehadiran virus dan titer antibodi dalam serum. Pada masa yang sama, doktor menetapkan satu kajian yang mengenal pasti DNA HBV menggunakan tindak balas PCR.
2. Dalam pesakit yang dijangkiti, kehadiran antigen IgG Anti-HBc dan antigen HBsAg ditubuhkan. Imunoglobulin spesifik menunjukkan peningkatan pesat kepekatan virus hepatitis dalam serum pesakit. Sekiranya ujian negatif untuk Anti-HBc, IgG dijalankan penyelidikan tambahan mengenai kehadiran penyakit lain.
3. Mengkaji tempoh pemisahan penyakit, mereka menentukan imunoglobulin HBeAg dan Anti-HBc IgM. Menubuhkan diagnosis yang betul adalah mungkin hanya selepas penemuan RNA virus - hepatitis dalam kes ini disahkan oleh kaedah molekul-biologi.
4. PCR digunakan secara meluas untuk diagnosis penyakit hati - satu kaedah kuantitatif membolehkan anda menetapkan rawatan berkesan hepatitis.

Kajian imunologi

Untuk mewujudkan keupayaan pesakit untuk menangani virus berbahaya, mendiagnosis tahap rintangan tubuh. Oleh kerana keseluruhan kompleks kajian makmal, indikator kuantitatif dan kualitatif faktor imunologi telah ditubuhkan - antibodi untuk hepatitis B.

Protein HBsAg adalah antigen permukaan yang merupakan komponen supercapsid (sampul virus) patogen. Fungsi utamanya adalah penyertaan dalam proses penjerapan virus oleh sel hati yang sihat. HBsAg peptida tahan kepada faktor persekitaran - alkali (Ph = 10), larutan 2% kloramine dan fenol.

HBsAg terdapat dalam serum orang yang dijangkiti. Sejurus selepas penampilannya, RNA bukan sahaja menerjemahkan sintesisnya, tetapi juga mengandungi zarah Ar utama penanda sebelumnya. Ia adalah bukti perkembangan fasa aktif hepatitis.

Kehadiran HBeAg dalam pesakit kronik menunjukkan permulaan tahap aktif proses menular.

Penanda anti-HBc mengandungi 2 jenis antibodi - IgG dan IgM. Ini adalah protein khusus kepada satu antigen. Bentuk akut penyakit ini dicirikan oleh kehadiran Anti-HBc dan IgM. Nilai positif mereka menunjukkan penyakit hati terdahulu.

Analisis kuantitatif

Untuk menentukan aktiviti patogen menetapkan analisis PCR. Ia menetapkan paras viral load dan peluang pemulihan pesakit. Reaksi rantai polimerase dilakukan selepas akhir tempoh laten. Dalam proses penyelidikan, bukan sahaja HBsAg ditentukan, tetapi juga penanda HBeAg.

Menyahkod analisis PCR untuk hepatitis membolehkan anda menentukan tahap aktiviti proses patologi dan keberkesanan terapi kompleks.

Doktor menentukan betapa mudahnya badan pesakit itu menjadi ubat antivirus, dan sama ada langkah-langkah boleh diambil untuk menghapuskan punca-punca penyakit hati kronik. Dalam kes ini, indeks transaminase meningkat, dan indeks aktiviti agen penyebab adalah beberapa kali lebih tinggi daripada indeks normal; kepekatan asid amino lebih daripada 106 naskhah DNA per ml.

Norma transaminase dalam darah sepadan dengan nilai enzim Asat dan Alat. Alanine aminotransferase pada wanita tidak melebihi 32 U / l, dan pada lelaki - 40 U / l. Kepekatan virus untuk orang yang dijangkiti pada usia awal adalah 100,000 kopi per ml.

Dalam fasa tidak aktif virus dan dalam kes Anti-HBc, HBV DNA berada dalam julat 2000 IU / ml, dan jumlah salinan tidak melebihi 10,000.

Kaedah Hibridisasi Molekul

Respon ELISA terhadap hepatitis menentukan jenis antigen dengan antibodi dan enzim. Penyelidikan bertahap boleh diterima, tetapi hanya seorang pakar yang telah menerima hasil analisis dalam masa yang boleh membuat diagnosis yang betul.

Penanda hepatitis virus semasa immunoassay adalah HBsAg, IgM Anti-Hbcor. Pada permulaan penyakit, mereka dinaikkan: PPBR-1.55, OPcr-0.27, HBsAg adalah 1.239, DNA virus tidak dikesan. Selepas rawatan, hasil analisis menunjukkan penurunan HBsAg kepada 1.07, dan HBeAg menjadi negatif. DNA virus hadir.

Jika nilai IgM, IgG, IgA negatif diperoleh - adalah perlu untuk menentukan sama ada penyakit itu tidak hadir atau pemulihan lengkap telah berlaku.

Nilai IgG positif menunjukkan imuniti yang terbentuk sepenuhnya. Dalam kes ini, IgM tidak dikesan. Adalah penting untuk mengetahui bahawa kajian mengenai hepatitis menunjukkan titer IgM yang tinggi.

Dalam tempoh akut penyakit, nilai-nilai IgG negatif muncul. Remisi penyakit virus disertai oleh IgM imunoglobulin negatif. ELISA agak mudah dan selamat untuk kesihatan pesakit.

Ujian darah biokimia

Kajian serum mengenal pasti patologi dalam tubuh, menentukan diagnosis, membolehkan anda menilai kerja hati dan mendapatkan maklumat tentang metabolisme. Analisis biokimia dijalankan pada waktu pagi. Untuk penyelidikan menggunakan bahan yang diperoleh daripada darah vena.

Adalah penting untuk mengikuti peraturan persediaan untuk ujian untuk hepatitis C - dalam kes ini, penyahkodan semua indikator tidak akan diputarbelitkan. Jumlah bilirubin biasanya 8.55-20.2 mmol / l, dan peningkatannya menunjukkan penampilan penyakit hati. Nilai-nilai AlAT dan Asat juga meningkat dalam kes hepatitis B.

Albumin dalam pesakit yang sihat ialah 35-55 g / l. Tahap protein plasma rendah menunjukkan keradangan virus hati.

Indeks LDH biasa berada dalam lingkungan 125-250 U / l, dan pertumbuhannya bermaksud ubah bentuk dan pemusnahan sel-sel organ yang berpenyakit. Penunjuk LDH (sorbitol dehydrogenase) menunjukkan keadaan tisu hati. Nilai normal ialah 0-1 U / l. Kadar pertumbuhan adalah komponen ciri dari akut hepatitis B atau peralihannya ke peringkat kronik.

Protein GGG mempunyai aktiviti yang rendah dalam plasma darah.

Pertumbuhannya diperhatikan dalam keradangan hati dan berterusan untuk jangka masa yang panjang. Norm - 25-49 U / l untuk lelaki, bagi wanita, penunjuk adalah jauh lebih rendah - 15-32 U / l.

Penyahkodan tanda hepatitis B kronik

Pengenalpastian penanda penyakit hati adalah tugas utama doktor, yang bertujuan untuk mencegah kesilapan dalam diagnosis. Adalah penting untuk mengetahui bahawa faktor fisiologi yang berikut mempengaruhi keputusan analisis:

Satu meja antigen dan penyahkodan mereka akan membolehkan pesakit mendapat idea tentang jenis penyakit itu.

Jenis PCR untuk hepatitis B dan tafsiran hasilnya

Tindak balas rantai polimerase adalah sejenis ujian darah yang dapat mengesan virus hepatitis B dengan tepat. Satu ciri kaedahnya ialah ia dapat menunjukkan HBV pada peringkat awal - satu bulan selepas jangkitan, sementara antigen tertentu dikesan dalam pesakit hanya selepas 2 bulan. PCR dapat mengesan bukan sahaja virus DNA biasa, tetapi juga strain mutan yang tidak dapat dilihat oleh analisis lain.

Apabila menyahkod PCR untuk hepatitis B, keputusannya dibandingkan dengan nilai standard. Berdasarkan hal ini, kesimpulan dibuat tentang kehadiran penyakit (hasil positif), konsentrasi virus (aktivitas) atau ketiadaan penyakit (hasil negatif). Pemprosesan data adalah 2 minggu.

Jenis PCR untuk hepatitis B virus

Terdapat 2 jenis diagnostik yang ditetapkan untuk hepatitis B. PCR berkualiti tinggi menjadikannya mungkin, dengan ketepatan 100%, untuk mengatakan sama ada HBV berada dalam darah atau tidak. PCR kuantitatif menunjukkan aktiviti virus, iaitu berapa banyak DNA HBV terkandung dalam 1 ml darah.

PCR berkualiti tinggi dan tafsirannya

Ujian darah untuk hepatitis B oleh PCR hanya dapat mengesan kehadiran serpihan DNA. Dilantik dalam kes apabila pesakit itu mengesyaki jangkitan HBV (HBV) atau apabila kaedah diagnosis lain, sebagai contoh, ujian serologi tidak memberikan jawapan yang jelas. Menafsirkan keputusan apabila menjalankan analisis kualitatif adalah sangat mudah:

• hasil negatif - tiada virus;
• Hasil positif - virus dikesan.

Tujuan PCR yang berkualiti tinggi adalah mengesahkan atau menafikan kehadiran virus hepatitis B, serta melakukan diagnosis awal. Sekiranya HBV dikesan dalam masa 1-2 minggu selepas jangkitan, rawatan akan berkesan. Dengan perkembangan aktif HBV selama 2 bulan dan ke atas, penyakit itu menjadi kronik dan tidak boleh sembuh sepenuhnya.

Dalam hal PCR berkualiti tinggi untuk hepatitis ditunjukkan oleh kehadiran virus, langkah seterusnya adalah untuk melakukan diagnosis kuantitatif.

PCR kuantitatif

Untuk tujuan rawatan atau penilaian berkesan terhadap terapi, hanya mengetahui bahawa pesakit mempunyai HBV tidak mencukupi. Ia perlu untuk mengukur nilai DNA virus hepatitis B dalam 1 ml darah, iaitu beban virus pada badan. Jenis PCR untuk hepatitis B ini dilakukan dalam kes berikut:

1. Sebelum menetapkan rawatan.
2. Untuk menilai keberkesanan terapi.
3. Untuk menentukan perkembangan rintangan virus terhadap ubat-ubatan yang diambil.
4. Untuk menentukan tahap di mana penyakit itu terletak.

Unit pengukuran untuk virus adalah unit antarabangsa (IU / ml) atau bilangan salinan DNA / ml, iaitu bilangan serpihan DNA setiap 1 ml darah. Nisbah di antara dua unit bergantung kepada sistem ujian yang dipilih dan antara 2 hingga 7 naskah / ml dalam 1 IU / ml. Jika sistem tidak diketahui, maka nilai purata digunakan untuk penukaran:

1 IU / ml = 5 salinan / ml

Jika analisis kuantitatif dilakukan dengan segera, kadar marginal untuk mendiagnosis penyakit adalah 75 IU / ml. Apabila keputusannya melebihi petunjuk ini, diagnosis HBV dibuat, di bawah - HBV tidak dikesan.

Rawatan PCR kuantitatif

Dalam hepatitis B, nilai viral load (viremia) berikut, salinan / ml, adalah piawaian PCR:

• 10 ^ 5 salinan / ml. Bilamana, dengan aktiviti besar virus, terdapat peningkatan ALT lebih kerap 2 kali dalam enam bulan, maka terapi antiviral segera diresepkan.

Untuk mengetahui bagaimana hepatitis DNA akan bertindak dari segi penyesuaian, iaitu, peralihan kepada bentuk kronik dari akut, hasil diagnostik PCR juga digunakan:

• DNA HBV sebanyak 2 x 10 ^ 6 salinan / ml bermakna pengambilan bentuk kronik penyakit itu tidak dapat dielakkan.

Menyediakan kajian

Untuk menentukan kehadiran HBV oleh PCR, darah diambil dari vena. Prosedur ini sentiasa dilakukan dengan ketat pada perut kosong dan lebih baik untuk pergi ke makmal pada waktu pagi apabila waktu rehat alami dari makanan adalah 8 jam. Agar keputusan peperiksaan itu betul, perlu mengetahui terlebih dahulu cara mempersiapkan diri pergi ke klinik dengan betul. Langkah-langkah tambahan adalah seperti berikut:

1. Penolakan dari makanan berlemak, merokok, alkohol dan sukan selama 12 jam sebelum prosedur.
2. Rehat selama 20 minit dengan segera sebelum menderma darah.
3. Sebelum memulakan prosedur, jururawat perlu diberi amaran mengenai ubat-ubatan yang diambil.

Perhatian! Sekiranya diagnosis dilakukan kepada kanak-kanak berumur di bawah 5 tahun, maka setengah jam sebelum prosedur, dia harus minum 1 gelas air rebus setiap 10 minit.

Menyimpulkan

Sehingga kini, diagnostik PCR untuk mengesan hepatitis B adalah kaedah yang paling tepat. Kaedah ini membolehkan anda melihat bentuk penyakit tersembunyi dan bermutasi, untuk mengenal pasti penyakit itu pada minggu pertama selepas jangkitan dan, dengan itu, untuk melakukan rawatan yang berkesan. Bergantung kepada keadaan, PCR kualitatif atau kuantitatif dilakukan, yang bertujuan untuk mengesan HBV dan mewujudkan aktivitinya. Untuk diuji, anda perlu menghubungi pakar virologi, pakar penyakit berjangkit atau pakar hepatologi.

Intipati analisis PCR untuk hepatitis B dan hasilnya

Hepatitis B virus berjaya dirawat jika ia dikesan dalam masa dan jumlah antibodi dan antigen dalam darah pesakit ditentukan dengan betul. Dengan bantuan immunoassay enzim untuk hepatitis, adalah mungkin untuk mengesan kehadiran penanda virus, tetapi mereka tidak dapat menentukan tahap proses yang tepat.

Untuk penilaian kuantitatif yang menggunakan diagnostik PCR. Menggunakan ujian ini, adalah mungkin untuk mengira bilangan penanda, meramalkan perjalanan penyakit dan kemungkinan penawar dengan bantuan ubat antiviral.

Kelebihan utama kajian ini ialah keupayaan untuk mengesan kepekatan minimum virus, untuk mengenal pasti patogen pada peringkat spesies.

Diagnosis Hepatitis B

Virus Hepatitis B sangat menular dan tahan kepada pengaruh luaran. Ia tetap aktif dalam darah pesakit selama beberapa minggu. Oleh itu, setiap orang berisiko jangkitan, walaupun profilaksis diperhatikan.

Untuk mendiagnosis penyakit itu menetapkan kajian berikut:

Intipati kaedah PCR

Ahli kimia Amerika K.Mullis menerima Hadiah Nobel, dan kaedah diagnostiknya masih digunakan.

Anak lelakinya kaedah PCR (tindak balas rantai polimerase) dianggap sebagai saintis dari Norway H. Kleppe. Dia pertama kali mula melakukan amplifikasi (pemulihan) DNA menggunakan rangkaian DNA yang pendek, iaitu, primer sintetik (jenis salinan).

Walau bagaimanapun, saintis gagal menyedari ideanya. Kajian serupa dibuat oleh ahli kimia Amerika K.Mullis, yang pada tahun 1993 dianugerahkan Hadiah Nobel untuk ciptaannya. Sejak itu, PCR telah digunakan untuk menubuhkan paterniti, mendiagnosis penyakit genetik, dan mengesan virus.

Inti dari tindak balas ini adalah dengan bantuan enzim sekeping DNA tertentu yang disalin. Anda hanya boleh menyalin kawasan yang sepadan dengan parameter yang ditentukan dan jika ia dalam sampel yang dibentangkan. Komponen berikut digunakan untuk memulakan reaksi:

1. DNA Matriks dengan tapak yang akan disalin.
2. Primer serupa dalam struktur kepada DNA.
3. Polimerase, iaitu enzim yang mencetuskan reaksi. Ia perlu termostable, iaitu, untuk menahan keterlaluan suhu.
4. Penyelesaian dengan parameter tertentu, memastikan laluan reaksi.

Reaksi dilakukan dalam beberapa peringkat:

Untuk pengesanan hepatitis B, dua jenis tindak balas digunakan: kuantitatif dan kualitatif.

PCR kuantitatif

Kaedah kuantitatif menentukan jumlah genom HBV

PCR kuantitatif melibatkan penciptaan serpihan serpihan DNA dan penentuan bilangan molekul. Pengukuran dilakukan selepas setiap peringkat, iaitu, dalam masa nyata. Ini dicapai dengan menggunakan kuar pendarfluor, yang termasuk dalam rangkaian molekul dan cahaya dalam tempoh tertentu kajian.

Kaedah ini digunakan untuk mengesan serpihan DNA yang merupakan penanda virus hepatitis. Menggunakan kaedah kuantitatif, adalah mungkin untuk mengasingkan genotip virus secara tepat. Dengan kata lain, bilangan salinan genom HBV bagi setiap nombor sel pesakit dikira.

Analisis kuantitatif memberikan jawapan kepada soalan berikut:

1. Dengan intensiti apa yang berlaku penyakit itu.
2. Betapa berkesannya rawatan.
3. Adakah rintangan dadah berkembang?

Juga, ukuran kuantitatif diperlukan untuk diagnosis tahap kronik jangkitan. Sekiranya jumlah DNA adalah di bawah 100 pcs / ml pada paras transaminase biasa, maka orang itu adalah pembawa virus.

Dalam fasa akut, jumlah antibodi lebih tinggi. Dalam terapi antiviral, peningkatan jumlah antibodi menunjukkan perkembangan rintangan dadah, ini merupakan isyarat untuk menyesuaikan rawatan.

PCR berkualiti tinggi

PCR berkualiti tinggi memberikan maklumat kurang, tetapi boleh menghapuskan jangkitan.

PCR berkualiti tinggi hanya boleh mewujudkan kehadiran patogen dalam darah. Jika mereka tidak hadir, pesakit tidak dijangkiti, jika patogen memasuki darah, hasilnya akan positif.

Walau bagaimanapun, dengan bantuan tindak balas kualitatif, mustahil untuk menjelaskan genom virus, peringkat penyakit ini. Oleh itu, untuk diagnosis HBV dilakukan pengukuran kuantitatif dan kualitatif.

Menyediakan kajian

Darah Venous diperlukan untuk analisis PCR. Ini mesti dilakukan pada waktu pagi pada perut kosong.

Pesakit harus bersiap sedia untuk kajian:

1. Selama 10 jam untuk menolak makanan, anda hanya boleh minum air bersih.
2. Pada malam berhenti mengambil alkohol, selama 4 jam tidak merokok.
3. Sebelum peperiksaan harus mengelakkan tekanan fizikal dan emosi.
4. Berhenti menggunakan ubat selama 2 hari, jika ini tidak mungkin, adalah perlu untuk memberitahu juruteknik makmal. Beberapa ubat mempunyai kesan ke atas hasil akhir.

Tafsiran data

Dalam tindak balas kuantitatif, penunjuk yang diperolehi dinilai berdasarkan bilangan salinan DNA.

Ia mudah untuk mentafsirkan data pengukuran yang berkualiti. Dia memberikan jawapan positif atau negatif.

Dalam tindak balas kuantitatif, adalah mungkin untuk menilai penunjuk yang diperolehi bergantung kepada bilangan salinan DNA. Unit ukuran adalah salinan / ml.

Data dikodkan seperti berikut:

1. Jika jumlah DNA HBV kurang daripada 90, maka jangkitan tidak hadir. Pesakit membangun imuniti selepas vaksinasi, atau dia sembuh penyakitnya.
2. Apabila bilangan salinan 2x100 bercakap tentang pembawa virus.
3. Nombor 2x106 menunjukkan tahap penyakit kronik.
4. Dengan DNA lebih daripada 2x109, pesakit mempunyai tahap hepatitis akut.

Keputusan yang salah

Kelebihan kaedah diagnostik yang menggunakan tindak balas polimerase adalah seperti berikut:

1. Pengesanan langsung patogen. Sebaliknya, ELISA menyediakan maklumat mengenai kehadiran antibodi kepada virus.
2. Spesifikasi. Iaitu, rantau DNA yang terdapat dalam sampel biomaterial yang disalin.
3. Hypersensitivity. Kaedah ini juga dapat mengesan serpihan sel tunggal.
4. Diagnosis penyakit di peringkat akut dan laten. Iaitu, adalah mungkin untuk mendiagnosis penyakit di peringkat manifestasi prasasti.

Kaedah ini mempunyai kelemahan yang mengakibatkan hasil palsu. Kelemahan yang paling penting ialah kebarangkalian pencemaran bahan. Sumber pencemaran utama adalah tiub ujian yang tidak diproses, tangan makmal, reagen.

Sebahagian daripada DNA dari tindak balas sebelumnya dapat memasuki darah. Oleh itu, peningkatan keperluan sanitari dikenakan ke atas makmal: bilik berasingan, tiub plastik, rawatan ultraviolet makmal, dan sebagainya.

Keputusan negatif palsu mungkin disebabkan oleh sensitiviti yang dikurangkan tindak balas. Ini berlaku dalam situasi berikut:

• pesakit sedang mengambil ubat, sebagai contoh, antikoagulan;
• orang itu mengalami tekanan fizikal sebelum analisis (bermain sukan, kerja keras);
• jangkitan telah berlaku baru-baru ini.

Sekiranya pesakit mempunyai kebarangkalian jangkitan yang tinggi, dan hasil kajiannya negatif, dia perlu diperiksa semula.

Lihat juga:

Kesimpulannya

Kaedah tindak balas rantai polimer adalah utama dan paling bermaklumat untuk diagnosis HBV. Ia tidak hanya membenarkan status pembawa jangkitan, tetapi juga untuk menjelaskan peringkat penyakit, untuk menilai hasil rawatan.

Untuk diagnosis yang lebih tepat, pengukuran kualitatif dan kuantitatif digunakan. Kelemahan kaedah ini termasuk kebarangkalian pencemaran, kepekaan berkurangan dan harga yang agak tinggi.

Agar hasilnya dapat dipercayai, seseorang harus mempersiapkan diri dengan betul untuk mengkaji dan menjalankannya di klinik dengan lesen yang sesuai dan reputasi yang baik.

Hepatitis B DNA dan PCR

Ujian DNA dan PCR virus hepatitis B adalah ujian yang paling sensitif yang mengesan jejak DNA molekul dalam hati yang mengenal pasti kehadiran virus. Inti kaedah ini terdiri daripada beberapa salinan serpihan DNA kepunyaan agen penyebab penyakit ini.

Jenis Hepatitis B PCR adalah tindak balas rantai polimerase reagen kimia luaran dengan bahan biologi yang diselidiki, bertujuan untuk mengenal pasti molekul DNA virus dalam darah dan indikator kuantitatif per unit volum. Analisis ini diberikan dalam kes berikut:

• jika anda mengalami tanda-tanda hepatitis B dalam pesakit;
• semasa aktiviti diagnostik untuk hepatitis bercampur;
• untuk menjelaskan keberkesanan terapi.

Untuk analisis PCR, darah vena dikumpulkan. Sebelum kajian itu, anda harus berhenti makan sekitar 8 jam.

Hasil yang normal apabila mengesan DNA dalam virus dianggap "tidak dikesan". Ia bermaksud bahawa virus tidak hadir dalam darah atau kandungannya tidak penting. Diagnosis akhir hanya boleh dibuat oleh seorang pakar berdasarkan analisis biokimia dan imunologi plasma plasma untuk jenis hepatitis B. Doktor menetapkan terapi. Ubat-ubatan sendiri melibatkan terlalu banyak risiko.

Pensambilan darah Venous dilakukan untuk analisis PCR.

Kaedah PCR memungkinkan untuk mengesan DNA patogen walaupun dengan kehadiran minimum dalam sampel darah terpilih. Di samping itu, analisis ini membolehkan untuk mengesan antigen yang telah dikembangkan untuk virus itu. Setiap antigen menunjukkan tahap penyakit tertentu:

• HBsAg - virus hadir pada masa ini.
• Anti-HBcor - patogen kini tidak hadir, tetapi pada masa lalu.
• Anti-HBs - dalam darah terdapat antibodi untuk hepatitis B (sebagai pilihan - herpes, HIV, klamidia, mycoplasmosis, candidiasis, tuberkulosis, encephalitis yang dilahirkan dengan tick dan banyak penyakit lain).

Patologi dan tanda-tandanya

Hepatitis B atau HBV adalah jangkitan virus yang menjejaskan sel hati. Ia berbahaya bukan sahaja melalui tindakan langsung pada parenchyma organ, yang melemahkan fungsi penghalang dan imuniti umum. Akibat yang lebih serius mungkin, seperti sirosis hati dan terjadinya neoplasma malignan.

HBV ditularkan melalui darah seseorang yang dijangkiti hepatitis, najisnya, melalui kontak dengan membran mukus, terutamanya semasa hubungan seksual, lesi kulit, melalui jarum suntikan tidak steril semasa pemindahan darah atau semasa operasi perut. Bayi baru mungkin dijangkiti oleh ibu sakitnya ketika menyentuh retak di putingnya.

Gejala berikut adalah ciri hepatitis B:

Keletihan yang tidak biasa

• meningkatkan keletihan pada beban rendah;
• keletihan yang luar biasa;
• berat di hipokondrium yang betul;
• mengurangkan nafsu makan, loya;
• keseronokan kulit, sclera mata;
• kotoran terang;
• air kencing gelap;
• sakit di sendi.

Tempoh inkubasi, selepas itu gejala-gejala ini mula muncul, adalah satu hingga enam bulan. Ini adalah tempoh pengumpulan sel-sel virus dalam aliran darah hepatik. Apabila kepekatan mereka mencapai jisim kritikal, virus itu akan memecahkan membran hepatosit dan terus berkembang di dalam sel-sel. Akibatnya, sel-sel hati mati, sirosis berkembang, yang, jika tidak ada langkah-langkah terapeutik yang sesuai, menyebabkan pesakit menjadi maut. Ujian darah yang tepat pada masanya untuk PCR dan Hepatitis B DNA membantu mengelakkan yang negatif.

Petunjuk untuk PCR adalah:

• ujian DNA positif yang mengesahkan diagnosis hepatitis B;
• hepatitis akut dan kronik;
• hepatitis bercampur;
• penentuan kuantitatif virus dalam serum darah;
• pembangunan taktik terapi berkesan.

Penyediaan untuk analisis

Penyediaan untuk diagnosis menggunakan PCR ditentukan oleh jenis biomaterial. Jadi darah dan air kencing hanya menyumbang pada waktu pagi, dengan perut kosong. Juga mengambil smear dan scrapes dari kawasan urogenital. Satu-satunya sekatan untuk wanita adalah haid. Seks adalah terhad untuk kedua-dua jantina pada malam sebelum penyelidikan.

Keputusan PCR boleh dianggap hanya boleh dipercayai jika pesakit disiapkan dengan baik untuk prosedur. Kajian ini membayangkan syarat-syarat berikut:

• penuh dengan keselesaan rohani, ketiadaan kegembiraan. Untuk memastikan analisis ini dapat diluluskan walaupun di rumah. Hanya perlu memanggil doktor dengan peralatan yang sesuai;
• menjauhi makanan, alkohol, merokok, aktiviti fizikal sekurang-kurangnya 8-12 jam sebelum analisis, jika tidak, data penyelidikan akan diputarbelitkan;
• 15-20 minit berehat sepenuhnya sebelum pengumpulan darah;
• pemberhentian ubat-ubatan (jika ini tidak mungkin, makmal perlu diberi amaran);
• kanak-kanak di bawah umur lima tahun untuk setengah jam sebelum analisis perlu diberi air rebus untuk diminum dalam bahagian kecil.

Bagaimana kajiannya

Analisis PCR berdasarkan prinsip-prinsip yang digunakan oleh biologi molekul. Mereka terdiri daripada penggunaan enzim-enzim khas yang melekat dan meniru bahagian-bahagian DNA dan RNA daripada agen berjangkit yang terdapat di dalam darah. Selepas operasi ini, sampel yang diperolehi dikenal pasti oleh pangkalan data yang terdapat di makmal. Pada masa yang sama, jenis jangkitan dan kepekatan dalam darah patogen dikesan.

Untuk kajian ini, amplificator digunakan - termostat yang mampu memanaskan dan menyejukkan tiub dengan biomaterial. Ini adalah perlu untuk mengaktifkan proses replikasi. Ketepatan analisis bergantung kepada ketepatan parameter suhu.

Keputusan penyahkodan

Hasil positif bagi pesakit adalah kesimpulan makmal "tidak dikesan". Ini bermakna ketiadaan DNA hepatitis B dalam darah. Dalam istilah berangka, ini adalah kira-kira 120 IU / ml, atau 200 naskhah setiap unit darah yang sama. Nilai ini adalah norma. Keperluan bahan biologi adalah bahawa ia tidak boleh tercemar.

Mengekodkan hasil analisis yang lain membolehkan diagnosis berikut dibuat:

• Kepekatan DNA Hepatitis B dalam darah adalah lebih daripada 200 naskhah, tetapi di bawah paras kritikal. Patologi yang teruk tidak hadir.
• Viremia dalam bentuk ringan, sehingga 500 salinan setiap ml. Pilihan rawatan bergantung kepada petunjuk biopsi hati dan tahap kemerosotan fungsinya.
• Meningkatkan kepekatan virus (lebih daripada 500 salinan / ml). Proses keradangan dalam fasa aktif dan memerlukan terapi antiviral intensif.
• Beban virus maksimum (lebih 800 salinan per ml.). Langkah-langkah terapeutik dikembangkan atas dasar keadaan pesakit dan sepenuhnya ditujukan untuk peningkatan maksimum yang mungkin.

Bagi pesakit, hasil yang baik ialah kesimpulan "tidak dikesan"

Menentukan penunjuk kuantitatif kandungan DNA hepatitis B semasa PCR adalah asas untuk pilihan kursus terapeutik. Selepas tiga atau enam bulan, ujian dilakukan semula untuk menguji keberkesanan terapi antiviral.

Ciri reaksi rantai polimerase

Dalam kaedah PCR menggunakan dua pendekatan untuk penentuan DNA kepunyaan virus: kualitatif dan kuantitatif.

Pendekatan kualitatif mengesahkan atau menafikan kehadiran hepatitis B. PCR ditetapkan atas permintaan seorang pesakit yang mengesyaki bahawa dia dijangkiti dengan jangkitan HBV atau dalam hal apabila diagnosis awal tidak memberi hasil yang tidak jelas dalam cara lain.

Sekiranya virus hepatitis B dapat dikesan tidak lebih dari dua minggu selepas masuk ke dalam badan, prognosis positif untuk rawatan kemungkinan besar. Pada masa akan datang, penyakit itu akan mula berkembang. Selepas kira-kira dua bulan, dia akan memasuki fasa kronik. Penyembuhan lengkap dalam kes ini akan menjadi mustahil.

Pendekatan kuantitatif untuk PCR hanya digunakan apabila virus dikesan. Dia menilai:

• viral load spesifik pada hati;
• keamatan perkembangan penyakit;
• penentangan terhadap ubat-ubatan antiviral;
• keberkesanan rawatan.

Petunjuk ini adalah kepentingan praktikal langsung. Terutamanya penunjuk kuantitatif DNA. Prognosis dalam fasa akut hepatitis B bergantung kepada kepekatan virus di dalam aliran darah hati. Oleh itu, kepekatan rendah sel-sel virus hampir tidak mengecualikan peralihan akut kepada hepatitis kronik. Pesakit sedemikian tidak menimbulkan bahaya kepada orang lain. Beban viral yang tinggi menyumbang kepada penyesuaian proses patologi dan kemungkinan jangkitan hepatitis pada orang yang bersentuhan dengan pesakit.

Terdapat juga hubungan antara kepekatan gen virus dalam darah dan degenerasi kirrotik pada hati, dan berlakunya kanser parenchyma.

Ujian PCR membantu doktor mengesan pembawa virus.

Keberkesanan terapi antiviral ditentukan oleh tahap penurunan kepekatan DNA hepatitis B dalam peredaran hepatik. Hasil yang mencukupi ialah pengurangan beban virus sebanyak 1-2 kali dengan rawatan intensif selama tiga bulan hingga enam bulan. Kadar yang lebih rendah memerlukan perubahan dalam rawatan.

Prognosis perkembangan patologi dan pelantikan terapi yang sesuai berasal dari:

• jumlah kuantitatif DNA virus hepatik dalam serum darah;
• parameter biokimia yang berkaitan (contohnya, tahap leukosit dalam darah dan kandungan bilirubin di sana);
• penanda jangkitan virus;
• keputusan biopsi hati.

Tujuan umum PCR

Analisis dengan bantuan tindak balas rantai polimer membantu doktor:

• mengesan pembawa virus;
• meramalkan pembangunan jenis hepatitis B;
• pastikan penyakit itu menjadi kronik;
• memantau aktiviti virus dalam semua fasa pembangunan;
• mengenalpasti strain hepatitis B mutan dan tersembunyi;
• menilai keberkesanan rawatan virus ketika memilih taktik tertentu dan mengubahnya jika terjadi kejayaan yang tidak mencukupi.

Kelebihan kaedah

Tidak seperti ujian lain yang digunakan untuk mendiagnosis hepatitis B, PCR mempunyai:

Analisis PCR sangat sensitif.

1. Kepekaan yang luar biasa. Teknik ini membolehkan penyelidik mengesan agen penyebab penyakit ini, walaupun kepekatan molekul DNAnya dalam darah adalah minima. Ini membolehkan anda mengambil langkah-langkah pencegahan dan pengambilan pada tahap awal penyakit, ketika nampaknya belum dinyatakan dengan gejala apa pun.
2. Peluang peluang yang luas. PCR dapat mengesan bukan sahaja agen penyebab hepatitis B virus, tetapi juga beberapa patologi lain.
3. Pendekatan universiti. Bahan biologi untuk penyelidikan boleh menjadi darah, air liur, sel-sel dan kulit mukus.
4. Kecekapan. Kesimpulannya akan siap persis satu hari selepas pensampelan darah (hasil analisis itu sendiri diperoleh tidak lebih dari 7 jam).
5. Kredibiliti. Di bawah semua syarat kaedah PCR, tidak pernah menunjukkan data palsu.
6. Kajian kebolehcapaian harga. Pada kos, PCR hanya sedikit lebih tinggi daripada ujian biasa yang menggunakan darah sebagai biomaterial.

Satu-satunya kos penyelidikan adalah kerumitan teknologinya. Untuk pelaksanaan PCR yang berkualiti tinggi memerlukan bahan biomas yang sangat bersih, peralatan moden dan kakitangan yang terlatih. Adalah lebih baik memohon diagnostik menggunakan kaedah ini untuk makmal khusus.

Virus hepatitis B merujuk kepada penyakit, penawar lengkap yang mungkin hanya pada tahap perkembangan awal. Kenal pasti penyakit dalam fasa ini membantu diagnosis hipersensitif oleh PCR. Gejala pertama yang menyebabkan kecurigaan kerosakan hati oleh virus harus menjadi alasan untuk berunding dengan pakar. Sekiranya diagnosis disahkan, rawatan perlu bermula dengan segera. Ini akan meningkatkan prognosis dan meningkatkan kemungkinan menyokong hati dalam keadaan yang sihat selama bertahun-tahun.