Mengira Bilangan Sel Darah Putih

Prinsip Mengira leukosit semasa mikroskop dalam sebilangan kuadrat ruang pengiraan dan pengiraan nombor mereka dalam 1 liter darah, dengan mengambil kira pengencangan darah dan jumlah ruang pengiraan.

Reagen: 3-5% larutan asid asetik, berwarna untuk pewarnaan nuklei leukosit dengan beberapa titisan larutan biru metilena. Penyelesaiannya mempunyai warna biru, boleh disimpan untuk masa yang lama.

Kursus penentuan. Dalam tiub ujian kering tuang 0.4 ml larutan asid asetik. 0.02 ml darah dikumpulkan dari jari (anda boleh menggunakan darah vena yang menstabilkan antikoagulan). Lap hujung pipet, kemudian tiub darah ke bahagian bawah tiub, campurkan, dail semula dan tiup campuran darah dan reagen (pipetting). Labelkan tiub dan biarkannya dikira. Simpan campuran darah dengan larutan asid asetik tidak disarankan lebih dari 2-4 jam.

Darah dicairkan dalam tiub ujian dengan asid asetik, dicampur dengan teliti dan isi dengan ruang pengiraan. Ruang penuh dibiarkan dalam kedudukan mendatar selama 1 minit untuk menyelesaikan sel darah putih. Tanpa mengubah kedudukan mendatar kamera, mereka meletakkannya di atas meja mikroskop dan pembesaran rendah (lensa mata 10 ×, kanta 8 ×) mengira sel darah putih dalam 100 dataran besar, yang sepadan dengan 1600 kecil.

Untuk ketepatan yang lebih besar, leukosit dikira merentasi grid dalam kotak besar, tidak dibahagikan kepada kotak kecil dan jalur, bermula dari sudut kiri atas grid. Untuk kontras yang lebih baik, tolak bidang pandangan, jatuhkan kondensor dan tutup apertur. Sel-sel yang terletak di dalam alun-alun dan berbaring di mana-mana dua baris dikira agar tidak mengira sel yang sama dua kali.

Pengiraan bilangan leukosit dilakukan mengikut formula:

di mana X ialah bilangan leukosit dalam 1 μl darah; dan - bilangan leukosit dalam 100 dataran besar; 20 - pencairan darah; 100 ialah bilangan dataran besar; 250 ialah faktor penukaran setiap 1 μl, kerana volum satu persegi besar ialah 1/250 μl (sebelah persegi ialah 1/5 mm, ketinggiannya adalah 1/10 mm).

Dalam praktiknya, untuk mengira bilangan leukosit dalam 1 μl darah, bilangan mereka dalam 100 kotak besar didarabkan dengan 50, dan dalam 1 liter - nilai yang dihasilkan didarabkan sebanyak 106.

Nota Apabila menghitung leukosit, ralat tidak dapat dielakkan dalam 6-8% kes.

1. Dengan sejumlah besar normosit dalam darah periferal, mereka dikira dalam bilangan leukosit (kedua-dua leukosit dan normosit - sel nucleated). Untuk menetapkan bilangan leukosit dengan betul, dari jumlah bilangan sel darah nukleus perlu mengurangkan bilangan normosit.
2. Kesalahan yang selebihnya adalah serupa dengan yang timbul ketika mengira jumlah sel darah merah dalam ruang pengiraan.

Kiraan leukosit

Untuk mengumpul darah dalam pengadun leukosit dengan tanda 0.5. Segera tambahkan kepada darah satu larutan pencairan asid asetik 3% untuk menandakan 11. Benarkan dengan sempurna kandungan kapilari dan isi semula bilik Goryaev dengannya. Pengiraan dilakukan dalam sekurang-kurangnya 100 dataran besar. Ini adalah garis besar yang tidak digariskan, yang dikelompokkan menjadi empat dalam grid kamera Goryaev. Kirakan bilangan leukosit dalam 1 l darah dengan formula:

L = N x 4000 x 20 x 10 6

di mana: N adalah bilangan leukosit dalam seratus dataran besar; 4000 adalah pengganda yang mengurangkan jumlah kuadrat kecil kepada jumlah 1 μl darah; 20 - pembetulan untuk pencairan darah; 1600 - bilangan leukosit dalam petak kecil; 10 6 - bilangan mikrolit dalam 1 l.

Cadangan untuk pendaftaran

Sebagai kesimpulan, bandingkan keputusan yang diperoleh dengan nilai normal.

Makmal № 7.3

Menentukan jumlah hemoglobin dalam darah

194.48.155.245 © studopedia.ru bukan pengarang bahan yang diposkan. Tetapi menyediakan kemungkinan penggunaan percuma. Adakah terdapat pelanggaran hak cipta? Tulis kepada kami | Maklumbalas.

Lumpuhkan adBlock!
dan muat semula halaman (F5)
sangat diperlukan

Mengira Bilangan Sel Darah Putih

Leukositosis boleh menjadi mutlak (benar) dan relatif (redistributif).

Leukositosis mutlak diperhatikan dalam proses keradangan akut, nekrosis tisu, jangkitan bakteria akut (kecuali demam kepialu, brucellosis, tularemia, dll), keadaan alahan, tumor malignan (dengan kemusnahan tisu), kecederaan kepala tertutup dan pendarahan di otak, kencing manis. koma uremik, kejutan, kehilangan darah akut, sebagai reaksi utama - dengan penyakit radiasi. Peningkatan ketara dalam jumlah leukosit berlaku dengan leukemia.

Relatif (redistributif) adalah akibat daripada penerimaan leukosit dalam aliran darah dari organ-organ yang berkhidmat untuk depotnya. Ia berlaku selepas makan (makanan leukositosis), mandi panas dan sejuk, emosi yang kuat (leukocytosis vegetovaskular), kerja otot yang sengit (leukositosis myogenic), dan sebagainya.

Leukopenia Leukopenia dianggap sebagai penunjuk perencatan keupayaan fungsi sumsum tulang akibat pendedahan kepada bahan toksik (arsenik, benzena, dan lain-lain), beberapa ubat (sulfanilamides, chloramphenicol, butadione, immuno, cyclophosphamide, dll.), Virus (influenza, hepatitis virus, campak, dan lain-lain), mikroba (kepialu, brucellosis, dan sebagainya), radiasi pengionan, sinar-X dan hypersplenism (fungsi limpa meningkat).

Leukositosis dan leukopenia jarang dicirikan oleh peningkatan berkadar (penurunan) dalam jumlah leukosit semua jenis (contohnya, leukositosis dengan penebalan darah); dalam kebanyakan kes terdapat peningkatan (penurunan) dalam bilangan mana-mana satu jenis sel, oleh itu istilah "neutrophilia", "neutropenia", "limfositosis", "limfopenia", "eosinophilia", "eosinopenia", "monositosis", "monocytopenia", "Basophilia."

Dalam penilaian klinikal perubahan dalam jumlah leukosit, sangat penting dilampirkan pada nisbah peratusan bentuk individu leukosit, iaitu, formula leukosit.

Penghitungan darah Leukocyte seseorang yang sihat:

Jumlah relatif Jumlah mutlak

Basofils............................0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l

Eosinophils.........................0.5-5% 0.02-0.30 x 10 9 / l

Neutrophils: - myelocytes............ 0% tidak hadir

- ditikam... 1-6% 0.040-0.300 x 10 9 / l

- dibahagikan....47-72% 2.0-5.5 x 10 9 / l

Limfosit..................................19-37% 1.2-3.0 x 10 9 / L

Monocytes...............................3-11% 0.09-0.6 x 10 9 / L

Penghitungan leukosit dilakukan di dalam smear darah periferal berwarna. Untuk penafsiran yang betul tentang hasil kajian formula leukosit, disyorkan untuk mengira dalam kuantiti mutlak, tetapi tidak pada yang relatif. Kaedah-kaedah yang paling umum melukiskan smear oleh Romanovsky-Giemsa, Pappenheim. Di bawah rendaman, sekurang-kurangnya 200 sel dikira, dan nisbah peratusan beberapa jenis leukosit diperolehi. Analisis leukogram dengan mengambil kira parameter darah lain dan gambar klinikal adalah kaedah pemeriksaan yang berharga, membantu dalam diagnosis dan penentuan prognosis penyakit.

Penyebab utama neutropilia.

Jangkitan bakteria akut - setempat dan umum.

Keradangan atau nekrosis tisu.

Kesan ubat (kortikosteroid).

Penyebab utama neutropenia.

Jangkitan - bakteria (demam kepialu, brucellosis, tularemia, demam paratyphoid) dan virus (hepatitis berjangkit, campak, influenza, rubela dan lain-lain).

Kesan myelotoxic dan penindasan granulocytopoiesis (radiasi pengion; agen kimia - benzena, aniline, DDT, kesan ubat - sitostatics dan immunosuppressants; vitamin-B₁₂-anemia kekurangan asid folik, leukemia akut aleukemia, anemia aplastik).

Pendedahan antibodi (bentuk imun) - hipersensitiviti terhadap ubat, penyakit autoimun (SLE, arthritis rheumatoid, leukemia limfatik kronik), manifestasi isoimun (penyakit hemolitik pada bayi yang baru lahir).

Pengagihan semula dan pemendapan dalam organ - keadaan kejutan, penyakit dengan splenomegaly dan hypersplenism.

Bentuk keturunan (neutropenia kronik benigna keluarga).

Penyebab utama eosinofilia.

Pencerobohan parasit (trichinosis).

Lesi kulit kronik - psoriasis, pemphigus, ekzema.

Tumor (varian eosinophilic leukemia).

Penyakit lain - Endokarditis fibroplastik Lefflera, demam merah.

Dalam fasa pemulihan jangkitan dan penyakit keradangan (tanda prognostik yang menggalakkan).

Punca eosinopenia (aneosinophilia).

Peningkatan aktiviti adrenokortikosteroid dalam badan.

Penyebab utama basofilia:

Leukemia myeloid kronik dan erythremia.

Penyebab utama monositosis.

Infeksi bakteria subakut dan kronik.

Jangkitan parasit - leishmaniasis, malaria.

Hemoblastosis - leukemia monosit, limfogranulomatosis, limfoma.

Syarat-syarat lain adalah SLE, sarcoidosis, arthritis rheumatoid, monositosis yang berjangkit; dalam tempoh pemulihan daripada jangkitan, apabila meninggalkan agranulositosis, selepas splenectomy.

Pengurangan jumlah monosit adalah penting terutamanya dalam menilai nisbah limfosit-monositik dalam tuberkulosis pulmonari.

Penyebab utama lymphocytosis.

Jangkitan - virus akut (mononucleosis berjangkit, campak, rubella, cacar air), bakteria kronik (tuberkulosis, sifilis, brucellosis), protozoal (toxoplasmosis).

Hemoblastosis (leukemia limfositik, limfoma).

Penyakit lain - hipertiroidisme, penyakit Addison, vitamin B₁₂-anemia kekurangan folik, anemia hypo dan aplastik.

Lymphocytopenia diperhatikan di SLE, penyakit Hodgkin, tuberkulosis meluas dari kelenjar getah bening, di peringkat terminal kegagalan buah pinggang, penyakit radiasi akut, keadaan imunodefisiensi, mengambil glukokortikoid.

Peningkatan atau penurunan bilangan jenis leukosit dalam darah boleh menjadi relatif atau mutlak. Jika hanya peratusan jenis sel darah putih yang tertentu berubah, neutrophilia relatif, eosinopenia relatif, dan lain-lain berlaku. Peningkatan atau penurunan kandungan mutlak jenis leukosit, iaitu bilangan sel per unit volum darah, dipanggil neutrophilia mutlak, eosinopenia mutlak, dan sebagainya.

Peralihan formula ke kiri (meningkatkan bilangan bentuk neutrofil muda) adalah tanda keradangan atau proses nekrotik dalam tubuh.

Peralihan formula leukosit ke kanan adalah ciri-ciri penyakit radiasi dan vitamin-B₁₂-anemia kekurangan asid folik.

Ketiadaan atau pengurangan ketara dalam bilangan semua jenis leukosit granular - granulosit (neutrophils, eosinophils, basofils) ditentukan oleh istilah agranulocytosis. Bergantung kepada mekanisme kejadian, myelotoxic (kesan sinaran pengionan, pengambilan sitostatik) dan imun (hapten dan agranulocytosis autoimun) dibezakan.

Kiraan leukosit

Kaedah mengira dalam kamera. Mengambil dan mencairkan darah yang dihasilkan oleh kaedah tiub. 0.4 ml cecair pencair dan 0.02 ml darah kapilari dimasukkan ke dalam tiub (lebih baik Vidalevskaya). Pencairan yang terhasil dianggap sebagai 1:20. Larutan asid asetik 3-5% berwarna biru metilen biasanya digunakan sebagai pengencer (asetik asetik cair erythrocytes, noda biru metilena nukleus leukosit). Sebelum mengisi tabung Goryaeva tiub dengan darah yang dicairkan terperangkap dengan teliti. Ruang itu diisi dengan cara yang sama seperti pengiraan sel darah merah.

Leukosit adalah lebih kecil daripada erythrocytes (1-2 setiap persegi besar), oleh itu, untuk ketepatan, bilangan dibuat dalam 100 dataran besar (ungraded). Pengiraan: 100 dataran besar (1600 kecil) dikira sebagai leukosit.
Ingat bahawa jumlah kuadrat kecil ialah 1/4000 mm3, dan darah dicairkan sebanyak 20 kali, jumlah leukosit dalam 1 μl darah dikira: 4000 20 dan dibahagikan dengan 1600 = a x 1/2. Secara praktikal, untuk mendapatkan kandungan sebenar leukosit dalam 1 μl darah, adalah mencukupi untuk membahagikan separuh bilangan yang didapati dalam pengiraan dan menambah 2 nol. Kesalahan kaedah purata ialah ± 7%.

Lebih tepat (ralat 2-3%) dan sempurna adalah penghitungan leukosit yang menggunakan peranti elektronik. Penghitungan leukosit dalam kaunter partikel dijalankan mengikut prinsip yang sama seperti erythrocytes. Pra-darah dicairkan dan dicampurkan dengan mana-mana reagen yang menjalar sel darah merah. Dalam autoanalyzer "Technicon", larutan asid asetik digunakan seperti, dalam "Culter" dan "Celloskop" - saponin atau sapoglobin, yang ditambah dicairkan (1: 500, 1: 700) dalam larutan natrium klorida isotonik (6 titis setiap 20 ml pembiakan).

Pengiraan leukocyte darah dilakukan dalam smear darah perifer yang berwarna.
Adalah lebih baik untuk dikira pada titik nipis berhampiran akhir smear, sekurang-kurangnya 200 sel (kecuali leukopenia yang disebut), dan kemudian memperoleh nisbah peratusan jenis sel darah putih tertentu. Pengiraan adalah disyorkan dalam susunan yang sama: separuh daripada sel-sel mesti dikira di atas, separuh di bahagian bawah stroke, tanpa pergi ke tepi dan tengah, zigzagging (3-4 bidang pandangan sepanjang stroke, 3-4 bidang pada sudut tepat ke tengah-tengah strok, maka 3-4 bidang ke sisi selari dengan tepi, sekali lagi pada sudut kanan ke atas dan sebagainya ke satu pihak).

Penyediaan smear. Gelas yang dibasuh dan dibersihkan dengan teliti (pinggirnya) menyentuh setetes darah di tapak suntikan. Smear membuat kaca pengisar, meletakkannya pada sudut 45 ° ke slaid di hadapan drop. Setelah membawa gelas ke drop ini, mereka menunggu sehingga darah merebak di sepanjang pinggirnya, kemudian dengan pergerakan mudah cepat mereka mengerjakan kaca penggiling ke depan, tidak mengambilnya dari subjek sebelum ia mengeringkan seluruh titisan.

Tirus yang dibuat dengan betul mempunyai warna kekuningan (nipis), tidak mencapai tepi kaca dan berakhir dengan jejak (kumis).

Mengingatkan smear kering yang dihasilkan selepas penetapan awal. Fiksasi terbaik dicapai dalam alkohol methylene mutlak (3-5 minit) atau dalam campuran Nikiforov bahagian yang sama etanol dan eter yang mutlak (30 minit).

Cat hematologi utama termasuk metilena biru dan derivatifnya - azure I (metilene azure) dan azure II (campuran bahagian yang sama biru azure I dan metilena biru), kepada eosin kuning larut air berasid.

● Lukisan oleh Romanovsky-Giemsa. Cat Romanovsky-Giemsa (buatan kilang) mempunyai komposisi berikut: Azur II - 3 g, eosin kuning larut air - 0.8 g, metil alkohol - 250 ml, dan gliserin - 250 ml. Larutan cat kerja disediakan pada kadar 1.5-2 titisan cat siap setiap 1 ml air sulingan. Cat dicurahkan ke dalam smear dengan lapisan yang mungkin lebih tinggi; pewarna masa - 30-35 minit Selepas tempoh ini, swab dibasuh dengan air dan kering di udara. Dengan kaedah ini, nukleus dapat dibezakan dengan baik, tetapi granulariti neutropilik dari sitoplasma jauh lebih teruk, jadi ia digunakan secara meluas untuk mengotorkan perut darah periferal.

● Menggabungkan warna May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa mengikut Pappenheim. Pewarna selesai, fixative May-Grunwald, yang merupakan penyelesaian biru eosinmethylene dalam alkohol metilena, ditapis ke dalam smear tetap selama 3 minit. Selepas 3 minit, jumlah air sulingan yang sama ditambah ke cat yang meliputi penyelesaian dan pewarnaan diteruskan selama 1 minit lagi. Selepas itu, cat dicuci dan smear kering di udara. Kemudian smear kering dicat dengan larutan berair yang baru disediakan cat Romanovsky selama 8-15 minit. Kaedah ini dianggap sebagai yang terbaik, terutamanya untuk smear sumsum sumsum.

Peningkatan bilangan leukosit dalam darah periferal di atas paras normal dipanggil leukositosis, penurunan dipanggil leukopenia. Leukositosis (leukopenia) jarang dicirikan oleh peningkatan berkadar (penurunan) dalam jumlah leukosit semua jenis, contohnya, leukositosis dengan penebalan darah. Dalam kebanyakan kes terdapat peningkatan bilangan (penurunan) mana-mana satu jenis sel. Peningkatan atau penurunan bilangan jenis leukosit dalam darah boleh menjadi relatif atau mutlak, bergantung kepada jumlah jumlah leukosit - normal, dinaikkan atau menurun. Perubahan dalam bilangan, nisbah bentuk individu dan morfologi leukosit bergantung pada jenis dan virulensi patogen, sifat, jarak dan tahap proses patologi, reaksi individu organisma.

Leukosit (leucocytus)

Leukosit. Penentuan kuantitatif leukosit. Mengira leukosit menggunakan kamera Goryaeva. Kandungan kuantitatif leukosit. Leukositosis.

Sel darah putih

Bilangan leukosit dalam darah bergantung kepada kelajuan pembentukan mereka, dan penggerak mereka dari sumsum tulang, serta penggunaan dan penghijrahan mereka ke tisu (ke lesi), ditangkap oleh paru-paru dan limpa. Proses-proses ini, sebaliknya, dipengaruhi oleh beberapa faktor fisiologi, dan oleh itu jumlah leukosit dalam darah orang yang sihat adalah tertakluk kepada turun naik: ia meningkat pada akhir hari, semasa tekanan fizikal, tekanan emosi, pengambilan makanan protein, dan perubahan mendadak dalam suhu ambien.

Penentuan kuantitatif leukosit

Leukosit dikira menggunakan kamera Goryaev dan menggunakan kaunter automatik.

Mengira leukosit menggunakan kamera Goryaeva

Dengan kaedah in vitro mengambil darah untuk menghitung leukosit:

• 0.4 ml larutan 3-5% asid asetik yang berwarna biru metilena dicurahkan ke dalam tiub. Gunakan pipet kapilari untuk menarik 20 μl darah dari titisan segar (pencairan 20 kali), dengan berhati-hati meniupnya ke dalam tiub ujian dengan reagen dan bilaskan pipet tersebut. Campurkan dengan baik;
• kaca penutup yang bersih dan kering digosok ke dalam ruang supaya cincin pelangi terbentuk pada titik sentuhan;
• darah dicairkan dalam tiub ujian, kacau dengan baik. Akhir batang kaca bulat mengambil setetes darah dan membawanya ke tepi kaca yang dipancarkan dari ruang;
• selepas mengisi ruang, ia ditinggalkan selama 1 minit untuk berehat untuk pemendapan leukosit;
• Leukosit dianggap pembesaran rendah (objektif × 8 atau × 9, kanta mata × 10 atau × 15) dengan bidang pandangan gelap (dengan kondenser yang diturunkan atau diafragma yang sempit);
• untuk keputusan yang memuaskan, leukosit dikira dalam 100 kotak besar.

Mengetahui jumlah kuadrat besar dan tahap pengenceran darah, cari jumlah leukosit dalam 1 μl dan 1 l darah. Bahagian persegi besar ialah 1/5 mm, luasnya 1/25 mm2, jumlah ruang di atas persegi ini adalah 1/250 mm3.

Formula untuk mengira sel darah putih:

di mana B adalah bilangan leukosit dalam 100 dataran besar;
P - tahap pencairan (20).

Kiraan leukosit

Norm: 4.0-9.0 × 10 9 / L

Peningkatan jumlah leukosit di atas 9.0 × 10 9 / l dipanggil
leukositosis, penurunan bilangannya di bawah 4.0 × 10 9 / l - leukopenia. Walau bagaimanapun, walaupun 3.5 × 10 9 dalam 1 l leukosit untuk beberapa individu mungkin menjadi norma. Menurut kesusasteraan, orang-orang seperti ini telah meningkatkan ketahanan imun dan mereka kurang cenderung menjadi sakit, yang sepertinya disebabkan oleh tindak balas imun untuk memiliki rizab leukosit dalam tisu, di mana terdapat 50-60 kali lebih banyak daripada dalam aliran darah. Jelas sekali, dalam individu yang sihat dengan bilangan sel darah putih yang rendah dalam darah periferal, rizab mereka dalam tisu juga meningkat. Fenomena ini dijelaskan oleh sifat keturunan dan kekeluargaan atau dengan peningkatan pengaruh sistem saraf parasympatetik.

Leukopenia boleh berfungsi dan organik.
Leukopenia berfungsi dikaitkan dengan disregulasi pembentukan darah dan diperhatikan:

• dengan beberapa jangkitan bakteria dan virus (demam kepialu, influenza, cacar, rubella, penyakit Botkin, campak);
• di bawah tindakan dadah (sulfonamides, analgesik, anticonvulsants, antithyroid, cytostatic dan ubat lain);
• semasa kerja-kerja otot, pengenalan protein asing, kesan saraf dan suhu, kelaparan, keadaan hipotonik;
• leukocytopenia palsu mungkin dikaitkan dengan pengagregatan leukosit dalam penyimpanan jangka panjang darah pada suhu bilik (lebih daripada 4 jam).

Leukopenia organik akibat aplasia sumsum tulang dan penggantiannya dengan tisu adipose, berlaku apabila:

• anemia aplastik;
• agranulocytosis;
• leukemia leukopenik;
• beberapa bentuk penyakit Hodgkin;
• radiasi pengion;
• hypersplenism (utama dan menengah);
• penyakit kolagen.

Leukositosis

Leukositosis adalah tindak balas sistem hematopoietik kepada kesannya
faktor eksogen dan endogen. Terdapat leukositosis fisiologi dan patologi.

Leukositosis fisiologi adalah:

• pencernaan - selepas makan, terutamanya protein yang tinggi; bilangan leukosit tidak melebihi 10.0-12.0 × 10 9 / l dan selepas 3-4 jam ia kembali normal;
• dengan tekanan emosional (adrenalin), penuaan fizikal yang teruk, penyejukan, pendedahan cahaya matahari yang berlebihan (selaran matahari), pentadbiran beberapa hormon (katekolamin, glucocorticosteroids, dan lain-lain), pada separuh kedua kehamilan, semasa haid dan pengagihan leukosit tidak sekata dalam darah arus perdana.

Leukositosis patologi dibahagikan kepada mutlak dan relatif.

Leukositosis mutlak - peningkatan bilangan leukosit dalam darah sehingga beberapa ratus ribu (100.0-600.0 × 10 9 / l dan lebih).

• Selalunya diperhatikan dalam leukemia: dalam leukemia kronik - dalam 98-100% kes, dalam leukemia akut - dalam 50-60%. Mengubah nisbah sel leukosit dalam sumsum tulang dan salur darah berfungsi sebagai asas untuk diagnosis leukemia.

Relatif leukositosis diperhatikan:

• proses keradangan dan berjangkit akut, kecuali demam tifoid, selesema, cacar, rubella, penyakit Botkin, campak. Leukositosis terbesar (sehingga 70.0-80.0 × 10 9 / l) diperhatikan dalam sepsis;
• di bawah pengaruh bahan toksik (racun serangga, endotoksin), radiasi pengionan (selepas penyinaran);
• akibat daripada tindakan kortikosteroid, adrenalin, histamin, acetylcholine, dan persediaan digitalis;
• dengan penyisiran tisu (nekrosis), infarksi miokard, trombosis arteri periferal dengan perkembangan gangren, luka bakar, pleurisy eksudatif, perikarditis, uremia, koma hepatik;
• kehilangan darah yang ketara dalam kecederaan, pendarahan dalaman, ginekologi dan lain-lain.

Peningkatan bilangan leukosit dalam penyakit berjangkit dalam kebanyakan kes disertai dengan peralihan formula leukosit ke kiri

Mengira bilangan leukosit dan platelet

Faktor yang mempengaruhi ketepatan kajian sel darah putih

- penyimpanan darah panjang pada suhu bilik

Norma kiraan sel darah putih

Umur Bilangan leukosit

- 1 hari 11.6 - 22.0

- 1 minggu 8.1.- 14.3

- 1 bulan 7.6 - 12.4

- Dewasa 4.0 - 9.0

Kaedah untuk menentukan bilangan leukosit dalam darah.

- Mengira bilangan leukosit dalam ruang pengiraan

- Mengira leukosit dalam penganalisis hematologi

Menentukan bilangan leukosit dalam ruang pengiraan.

- Penghitungan leukosit di bawah mikroskop dilakukan selepas menyiram sel darah merah dalam 100 kotak besar kiraan pengiraan dan dikira semula untuk 1 liter darah, berdasarkan jumlah kotak dan pencairan darah. Kira leukosit perlu dibuat dalam masa 2-4 jam selepas pengumpulan darah.

- Sekiranya ada sel-sel merah nukleus dalam darah periferal, mereka tidak dilepaskan dan dikira bersama-sama dengan leukosit. Dalam kes ini, untuk menentukan jumlah sebenar leukosit, bilangan sel dalam baris merah dikurangkan daripada jumlah bilangan sel yang dikira.

- Sebagai contoh: Jumlah leukosit dalam pengiraan dalam ruang (atau penganalisis) -45x109 / l. Apabila mengira formula leukosit, didapati 50 erythroblas (normoblas) hadir setiap 100 leukosit.

Kami mengira jumlah sebenar leukosit dalam darah:

150 sel - 45 x 109 / l

100 sel (leukosit) - X

X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 * 10 / l

Oleh itu, jumlah sebenar leukosit dalam darah adalah 30 x109 / l.

Sumber utama kesilapan dalam perhitungan leukosit di dalam ruang:

- Nisbah darah dan asid asetik yang salah diambil dalam tiub ujian.

- Larutan asid asetik yang disiapkan secara tidak betul (pada kepekatan lebih daripada 5%, sesetengah leukocytes mungkin lyse, yang akan mengakibatkan pengurangan hasil).

- Pendedahan sampel yang berpanjangan pada suhu di atas 28 ° C, yang dapat mempercepatkan lisis leukosit dalam sampel dan membawa kepada meremehkan hasilnya.

- Pengisian bilik Goryaev yang salah. Seperti pengiraan sel darah merah, kamera mesti ditinggalkan selama 1 minit untuk menyelesaikan sel-sel.

- Kamera Goryaev tidak dibasuh dengan baik selepas definisi sebelumnya. Leukosit yang tinggal di dalam ruang boleh memaksimumkan hasil analisis.

Kaedah pengiraan platelet

- dalam bilik pengiraan

Setiap kumpulan kaedah mempunyai kelebihan dan kekurangan.

- Pengiraan platelet dalam ruang adalah cukup tepat, tidak memerlukan pengiraan bilangan sel darah merah. Sebaliknya, kaedah ini lebih susah payah, kerana platelet dalam bentuk asli diwakili oleh unsur-unsur kecil dan kurang jelas. Kelemahan kaedah ini adalah menghitung platelet pada waktu yang akan datang selepas mengambil darah.

- Menentukan bilangan platelet dalam darah smear adalah jauh lebih rendah dalam ketepatannya kepada kaedah kebuk atau kaunter automatik. Kesalahan dalam menghitung salur darah boleh disebabkan oleh kualiti yang tidak baik dalam smear dan penyebaran platelet yang tidak sekata, penentuan bilangan sel darah merah yang tidak tepat. Kelemahan yang ketara dalam kaedah ini adalah keperluan untuk menghitung platelet dan sel darah merah secara serentak dalam darah. Kelebihannya adalah keupayaan untuk mempelajari platelet pada bila-bila masa, tanpa mengira masa pengumpulan darah.

- Kaedah menentukan platelet menggunakan penganalisis hematologi membolehkan anda menentukan dengan tepat bilangan platelet, jumlah purata dan pengedaran mengikut jumlah.

Kiraan leukosit

Bilangan leukosit dikira dengan menggunakan kaunter automatik atau dalam ruang Goryaev. Untuk menghitung leukosit di dalam bilik, cecair Turk disediakan - larutan asid asetik yang berwarna dengan larutan metilen biru (0,1 ml larutan biru metilena 0,1 ml ditambahkan ke 9 ml 10% asid asetik). Dalam tiub ujian tuangkan 0.4 ml cecair Türk. Memperolehi betul-betul 0.02 ml darah, dengan teliti menambah cecair mencairkan. Pencairan darah adalah 1:20. Campurkan dengan baik dan biarkan selama 4 minit. Isi bilik Goryaeva, selepas teliti berjabat dengan tiub dengan darah yang dicairkan. Kamera dibiarkan selama 1 minit di permukaan rata untuk pemendapan leukosit. Kemudian leukosit dikira pada pembesaran rendah mikroskop (lens 8, kanta mata 10 atau 15) dengan medan pandangan gelap (dengan kondensor diturunkan atau diafragma yang sempit). Leukosit dianggap berada dalam 100 dataran besar yang tidak didedahkan, yang sepadan dengan 1600 kecil. Keputusan mengira sel-sel di dataran besar meringkaskan dan mengira jumlah mereka dalam 1 μl darah menggunakan formula:

di mana X ialah bilangan leukosit dalam 1 μl darah; A - bilangan sel dikira dalam 100 dataran besar; 1600 - bilangan dataran kecil; 20 - pencairan darah; 4000 adalah pengganda yang menghasilkan isipadu 1 μl darah, berdasarkan jumlah kuadrat kecil (1/4000 μl).

Mengira rumus leukosit. Pembedahan darah periferal yang diperincikan diperiksa. Satu keadaan yang perlu untuk pertimbangan yang betul tentang ciri-ciri morfologi sel darah adalah smear darah yang betul dan teratur. Saluran darah disediakan pada slaid kering, bersih, degeneratif, yang berusia dalam campuran Nikiforov (etil alkohol 96º dan dietil eter 1: 1). Mengambil slaid kaca untuk tepi panjang, sentuh permukaannya ke setetes darah (tetapi bukan kulit) yang dibebaskan dari tusuk, atau gunakan setem darah dengan mikrofon atau kapilari. Slaid kaca diadakan di atas meja atau di sebelah kiri untuk tepi sempit. Menggunakan tangan kanan, gunakan kaca tanah dengan tepi sempit ke kaca dengan darah ke kiri drop pada sudut 45 ° dan tolak ke kanan sehingga menyentuh darah. Mereka menunggu sehingga darah menyebar ke seluruh tepi kaca tanah, dan kemudian, dengan pergerakan cepat, cepat, mengarahkannya dari kanan ke kiri sehingga keseluruhan titisan habis. Satu setitik darah haruslah kecil dan proporsional supaya keseluruhan smear diletakkan pada kaca, tidak mencapai 1-1.5 cm sebelum kelebihannya. Smear buatan yang sangat kurus, mempunyai warna kekuningan dan berakhir dengan "penyapu." Penyedutan darah kering diletakkan di dalam hidangan khas untuk penetapan atau dalam kaca biasa yang mengandungi cecair (metil alkohol, masa penetapan 3-5 minit, etil alkohol, 30 minit, campuran Nikiforov, 20-30 minit). Persediaan tetap kering di udara, dan kemudian diwarnai dengan pewarna Romanovsky-Giemsa. Larutan cat siap Romanovsky-Giemsa (azureosin) dicairkan 1:10 dalam jumlah yang diperlukan untuk pewarnaan. Smear smear dibuang dengan cat dicairkan, yang dicurahkan ke dalam smear dengan lapisan yang mungkin lebih tinggi. Mewarna berlangsung bergantung pada suhu udara di dalam bilik dari 25 hingga 45 minit. Selepas menyelesaikan cat, basuh cat dengan air suling dan letakkan strok secara menegak di pendirian kayu untuk pengeringan. Mikroskopi smear darah dijalankan dengan rendaman pada pembesaran 100 × 10. Penghitungan leukosit dilakukan di sepanjang garis zigzag ("garisan Meander"). 100-200 sel dikira, dengan mengambil kira bilangan bentuk leukosit individu: menusuk dan menegosiasi neutrofil, eosinofil, basofil, monosit, limfosit. Kirakan peratusan setiap jenis sel.

Mengira bilangan fagosit dan limfosit mutlak. Jumlah mutlak phagocytes (neutrophils dan monosit) dan limfosit vertebrata yang lebih tinggi dikira berasaskan data mengenai bilangan leukosit dalam darah periferal dan formula leukosit.

Ujian fungsi fagositik

Penentuan indeks fagositik dan nombor fagositik

Sebilangan besar teknik telah dibangunkan untuk menilai penyerapan dan pencernaan aktiviti leukosit. Kesemuanya berdasarkan kemampuan fagosit untuk menyerap zarah asing yang membentuk sistem ujian (sejenis jenis mikroorganisma, zymosan, lateks - objek penyerapan). Wahyu dilakukan secara in vitro atau dalam vivo. Cara penentuan umum adalah seperti berikut: Heparinized atau darah segar yang cair (atau penggantungan phagocyte) dicampur dengan jumlah yang sama penggantungan mikrob harian yang digantung (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) atau objek penyerapan lain. Campuran lembut dicampur dan diletakkan di dalam termostat (37-40 º C - untuk berdarah panas bergantung kepada suhu normal badan, 26 ° C - untuk ikan yang panas mencintai dan lebih rendah untuk penyayang sejuk). Selepas 15, 30, 45, 60 dan 90 minit, smear disediakan pada slaid, kering, tetap dengan metil alkohol atau campuran Nikiforov dan bernoda mengikut Romanovsky-Giemsa. Mereka memerhatikan smear di bawah perendaman dan menentukan aktiviti phagocytic - peratusan fagosit yang mengambil bahagian dalam fagositosis, indeks fagositik - bilangan mikrob ujian yang ditangkap oleh satu leukosit fagositik, nombor fagositik - jumlah purata objek fagositik setiap 1 neutrofil aktif. Penilaian penunjuk pada selang waktu yang berbeza membolehkan kita untuk menganggarkan dinamika fagositosis. Biasanya, selepas 90 minit, indeks fagositik harus lebih rendah daripada selepas 45 minit dan 60 minit, kerana pencernaan mikrob. Sekiranya berlaku pencerobohan, ia tidak berubah.

Penilaian aktiviti fagosit dengan reaksi pengurangan tetrazol nitro-biru (ujian NBT)

Ujian ini adalah penunjuk fungsi bakterisida fagosit dan membolehkan anda menilai kemampuan mereka untuk membunuh oksigen yang bergantung kepada oksigen. Apabila mekanisme pembunuhan ini diaktifkan, enzim NADPH oxidase diaktifkan, yang membawa kepada penampilan spesies oksigen reaktif dalam phagocyte. Pelepasan bahan-bahan tersebut di dalam sel dipanggil letupan oksigen (pernafasan), yang boleh didaftarkan menggunakan ujian NBT. Dalam rumusan ujian ini, zat nitrosinium tetrazolium ditambah kepada phagocytes, ia diserap oleh sel dan, dengan kehadiran spesies oksigen reaktif, berubah menjadi bahan berwarna biru gelap, diformazan. Granum biru yang lebih gelap ditetapkan pada permukaan atau di dalam phagocyte, bentuk oksigen yang lebih aktif terbentuk, pembakaran yang lebih bergantung kepada oksigen.

Ujian NBT ditetapkan dalam dua versi: spontan dan diinduksi. Apabila menubuhkan ujian NBT secara spontan, fagosit dibiakkan dengan kehadiran NST tanpa pengaktifan awal sel-sel, apabila melaksanakan ujian NBT yang disebabkan, pengaktifan tindak balas fagositik ditambah kepada medium budaya. Penetapan ujian NBT dalam dua varian membolehkan pengiraan rizab fungsional sel, yang merupakan perbezaan antara bilangan (intensiti) sel-sel positif diformazan-positif dan bilangan (intensiti) sel-sel diformazan-positif spontan. Nilai-nilai ujian NBT yang diinduksi mencirikan aktiviti sel fagositik dengan adanya rangsangan antigen dan dianggap sebagai kriteria kesediaan mereka untuk fagositosis lengkap. Ujian NBT spontan membolehkan seseorang untuk menganggarkan tahap pengaktifan mekanisme membunuh oksigen yang bergantung kepada fagosit yang tidak diaktifkan. Ia mencirikan tahap pengaktifan sistem mikrobisida intrasel.

Untuk membentuk ujian NBT spontan, 0.05 ml penyelesaian 0.2% NBT dalam penampan kalium fosfat (0.1, pH 7.3) dan 0.05 ml penampan yang sama ditambah kepada 0.1 ml darah. Secara selari, sampel diletakkan untuk mengira ujian NBT yang diinduksi, di mana, bukannya 0.05 ml buffer, jumlah pengaktif fagosit yang sama ditambah (contohnya, pyrogenal pada kepekatan 50 μg / ml). Campuran tindak balas termostat dalam mandi air pada 37 ° C (30-60 min). Tepung ketumpatan sederhana disediakan, kering di udara dan dipasang di etil alkohol atau campuran Nikiforov (20 min), kemudian dicat dengan larutan berair neutral merah (0.1%, 1 min)

Selepas reaksi, smear darah adalah mikroskop di bawah rendaman (100 × kanta, 10x kanta mata). Di antara 100 sel, kadar neutrofil yang diaktifkan (DAN,%) yang mengandungi granul diformazan dikira. Menurut jumlah dipherformazan yang disimpan di dalam sel, aktiviti mereka dinilai dalam unit sewenang-wenangnya dan indeks pengaktifan neutrophil (IAN, unit yang digunakan) dikira:

di mana H_Neg. - bilangan sel yang tidak mengandungi granul diformazan;

H₁ - bilangan sel di mana kawasan deposit diformazan kurang daripada 1/3 kawasan teras;

H₂ - bilangan sel di mana deposit diformazan mengambil dari 1/3 kepada keseluruhan saiz nukleus;

H₃ - bilangan sel di mana deposit diformazan menduduki kawasan yang lebih besar nukleus.

Pengeluaran pekali penggerak (KM) yang dijalankan mengikut formula berikut: